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提取的核酸浓度高纯度好,为什么扩增的效果却很差

taoshuixian1 2017-04-06 05:04:27 549  浏览
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  • cuichaoqun92 2017-04-07 00:00:00
    总的来说包括了核酸的分离、提纯,核酸的扩增,检测,定性与定量分析等。下面以DNA为例说一下相关的概念。 1、DNA的分离提纯就那些试剂,那些步骤,网上一大堆视频的,自己去找吧。 2、扩增一般指的是PCR,需提供引物(引物具有特异性,比如说乙肝病毒基因的引物只能扩增乙肝病毒基因)、酶、底物等,三个流程一个循环:变性、复性、延长。 3、检测一般有紫外分光光度法,电泳分析,杂交分析。 (1)紫外分光光度法:此法的原理涉及到一些光学的知识,可以查询相关书籍以能更好的理解,可以做定量分析,分为单组份分析和多组分分析。 单组份分析有: 1)标准曲线法:用不通浓度的标准溶液,同一条件下测定吸光度A,以吸光度A为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,根据测得的待测样品吸光度,从标准曲线中便可知溶液浓度。 2)标准对照法:标准溶液浓度a,吸光度A,待测样品吸光度B,则根据朗-比定律有待测样品浓度为:B*a/A。 3)吸光系数法:吸光系数K,测得待测样品吸光度A,溶液的厚度d,根据朗-比定律,则待测样品的浓度为:A/(K*d)。 多组分分析没研究过了,自己查查相关资料吧。 (2)电泳分析是根据DNA的分子量和结构不同而在电场中的移动速度不同的原理,电泳的时候需要加MARKER或者已知的基因的片段进行测量。说说MARKER的概念吧,MARKER是由一些列一定梯度的基因片段组成的基因混合物,梯度一般有100bp,200bp,500bp等,MARKER电泳过后便形成很多条距离相等的条带,每两条条带之间的距离为前面提到的梯度值,MARKER用来做标准参考,具有标尺的作用

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