新人来报到，我Z近在做一个关于植物中DNA的提取。其中用到了酚氯仿异戊醇这个提取液，比例是25:24:1，在做的过程中有一部分疑问，想请大家解答。 1、这个有机溶液在静置的过程中会分层，上层是水层，下层才是有机层。在使用前我将他们混匀，再取。这样的话，... 新人来报到，我Z近在做一个关于植物中DNA的提取。其中用到了酚氯仿异戊醇这个提取液，比例是25:24:1，在做的过程中有一部分疑问，想请大家解答。
1、这个有机溶液在静置的过程中会分层，上层是水层，下层才是有机层。在使用前我将他们混匀，再取。这样的话，会有气泡的产生。那么是否应该混匀后在取，或者是直接去下层的溶液？另外异戊醇在这个溶液中起的是防止气泡产生的作用，那么是否可以通过增加异戊醇的比例来解决这个问题，这样的话时候会影响后续的提取过程。
2、在抽提过程中发现，上清液为粉红色。应该是被氧化了，饱和酚中应该是家里羟基喹啉来防氧化的，有人说可以再加巯基乙醇来防氧化，不知道在配置好的溶液中加入巯基乙醇是否可以，应该加多少的量，是否会影响后续的实验？
3、提取过程中常常用到离心技术，这种离心的转数是否有一定的讲究，有无相关的材料可以查询？在离心过程中，会不会破坏DNA的结构？
对于diyi个问题，我不知道你是用多大的体系。我们提植物基因组都是装在1.5的EP管里的，酚氯仿都是分别加到管里，从来不做预混，因此也不会出现你想多加异戊醇的问题了。事实上，我们都不用异戊醇这个消泡剂。
至于巯基乙醇，我们都是在研磨好，加酚氯仿之前的细胞裂解液里加0.5%的巯基乙醇。酚如果觉得氧化了就换一瓶吧。
离心转速一般在10000-13000rpm，都没问题，DNA很坚强，浓度又不高，没关系的。
其实Tris饱和酚的pH值本身就在7-8，所以pH应该不是问题。另外酚主要是作用与蛋白的，既然体系可以用酚就说明对DNA没什么大影响。原来在找不到Tris饱和酚的时候我还用过水饱和酚，pH在4左右，也提的不错。pH只是影响了DNA的溶解度而已。异戊醇这个东西真的是可加可不加。一般都是酚氯仿等体积混合抽一遍，再氯仿抽一遍。
实际上我有点困惑，酚氯仿异戊醇不应该分层啊！
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waitercleverH 
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