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生物实验,小麦种子做DNA提取,是否一定要用PCR扩增?

心诚々则凌 2009-02-24
如题,实验室要做小麦DNA分析,但是我们没有PCR的仪器,种子大概有好几十克那么多,是不是就不用买PCR了?急需解答,谢谢生物专业相关人士帮帮忙!谢谢了!
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真真切切ii
如果你不需要经常扩增DNA片段,你可以不去买PCR仪。但在这个实验中,是需要进行PCR操作的。因为你不可能做全基因组序列的变化研究,而是研究某些片段。你需要将这些片段通过PCR扩增出来,然后交给测序公司测序。

还有一种方法,你可以将提出的总基因组DNA交给测序公司,并告知你要考察的片段,测序公司会帮你进行扩增。

要提基因组DNA,几十克种子足够了。一般一克左右的组织样品提出的DNA就足够操作了。
2 0 2009-02-25 0条评论 回复
zpzp78
楼主有概念性错误吧。。。。

提取DNA本来就不需要PCR,你想想,你要的是小麦的全部基因组,而不是某个特殊的区域,你的需求能靠两个PRIMER就解决吗?当然,你有几十克的种子,应该够提取出来个100-200微克的DNA了。

如果你想单独分析某些DNA片段,那PCR仪肯定是需要的。不过在这个情况下,你仍然需要提取出DNA,然后再单独设计PRIMER。

你的课题没有写清楚,不过我相信你是要调查某些基因的变异吧?
12 0 2009-02-25 0条评论 回复
lindalyz66
PCR仪对于基因分析是必不可少的,哪怕你们实验室不购买也要借用别处的。
用于分析辐射育种后的变异,几十克种子中提取的DNA足够了。
11 0 2009-02-25 0条评论 回复
孚日の眼
要做基因分析,Z好是要有PCR仪器的。
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
标准的PCR过程分为三步:
1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下, 氢键断裂,形成单链DNA
2.退火(25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右Z佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍。
9 0 2009-02-25 0条评论 回复
﹏晴天娃娃
如果分析某个基因,就需要作PCR;如果全基因组分析,就没法PCR了。
如果只做几次PCR,可以去找公司或某个实验室。
13 0 2009-02-25 0条评论 回复
善缘小杰我爱你
应该要 几十克提取的DNA并不是很多
12 0 2009-02-25 0条评论 回复
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