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为什么在DNA提取过程中,Z好使用塑料试管

yuanxinhao3 2017-04-09
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DNA提取程所用主要设备哪些
DNA粗提取
①准备材料 新鲜菜花体积数95%酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h
②取材 称取30 g菜花,梗取花,切碎
③研磨 碎菜花放入研钵,倒入10 mL研磨液,充研磨10 min
④滤 漏斗垫尼龙纱布,菜花研磨液滤入烧杯(条件校滤液倒入塑料离管进行离,用1 000r/min旋转频率,离25 min,取清液放入烧杯)4 ℃冰箱放置几,再取清液
⑤加冷酒精 倍体积清液倒入两倍体积体积数95%冷酒精溶液,并用玻璃棒缓缓轻轻搅拌溶液(玻璃棒要直插烧杯底部)沉淀35 min,见白色DNA絮状物现用玻璃棒缓缓旋转,絮状物缠玻璃棒
(2)DNA鉴定
①配制二苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴入10 mL A液,混匀
②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管,加入4 mL 二苯胺试剂,混匀观察溶液颜色(变蓝)用沸水浴(100 ℃)加热10 min 加热程,随注意试管溶液颜色变化(逐渐现浅蓝色)
研磨液配制
Tris:10.1 g(相质量121.14),先加50 mL 蒸馏水溶解,用物质量浓度2 moL/L 盐酸调至pH8.0,再加述药品
NaCl:8.76 g(相质量58.44)
EDTA:37.2 g(相质量372.24)
SDS:20 g(相质量288.3)
待述药品全部溶解,再用蒸馏水定容至1 000 mL
若室温低于20 ℃配制药液,SDS呈沉淀析,需要加温,才能SDS溶解提前配制研磨液现沉淀,则应加温使沉淀溶解再使用
研磨液几种药品作用
SDS(十二烷基磺酸钠):使蛋白质变性,与DNA离
EDTA(乙二胺四乙酸二钠):DNA酶YZ剂,防止细胞破碎DNA酶降解DNA
物质量浓度0.15 moL/L氯化钠溶液:能溶解DNA
Tris/HCl:提供缓冲体系,DNA缓冲体系呈稳定状态(Tris三羟甲基氨基甲烷)
鉴定DNA其 用紫外灯照射鉴定DNA效具体鉴定
1.配制染色剂用蒸馏水配制万五溴化乙锭(EB)溶液
2.玻璃棒缠绕白色絮状物抹于蜡纸,再滴1滴EB溶液染色
3.蜡纸放紫外灯(260 nm)照射(暗室),见橙红色萤光(DNA紫外吸收高峰280 nm处)
4 0 2017-04-10 0条评论 回复
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