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霉菌孢子DNA怎么提取

dy的备胎 2017-11-14
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汉共操耗侄障说
(1) 收集霉菌孢子并稀释涂布于贴有玻璃纸的PDA培养基中,培养20 h后收集新鲜菌丝体
(2) 取0.5 g 菌丝体置于冰预冷的研钵中,加入0.1 g石英砂和2 mL冰预冷的CTAB抽提液,加入蛋白酶K至终浓度0.1 mg/mL,置冰上研磨成均匀浑浊液;
(3) 液体转入5 mL离心管并加入1/10体积的10% SDS,65℃温浴20~30 min后冷却至室温;
(4) 加入等体积Tris饱和酚-氯仿(1:1)抽提2次,上层水相转入新的离心管;
(5) 加入等体积氯仿抽提1次,上层水相转入新的离心管;
(6) 加入无DNase活性的RNase A至终浓度10 g/mL,37℃温浴30~60 min;
(7) 重复步骤5一次;
(8) 上层水相加入2倍体积无水乙醇,轻轻混匀;
(9) 用使用无菌移液器吸嘴轻轻挑出染色体DNA,在70%乙醇中洗涤一次,室温凉干残留乙醇;
(10) 加适量体积的TE溶液溶解,保存于4 ℃。
18 0 2017-11-15 0条评论 回复
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