简明扼要讲一下Southern blotting，PCR，原位杂交

Southern blotting：印迹（Blotting）通常是指通过吸附或电泳方法将经凝胶电泳分离的大分子物质从胶上转移到固相载体上，再与特定的探针反应从而达到检测或鉴定这些大分子物质的过程。Southern于1975年首先建立从琼脂糖凝胶电泳中分离的DNA转至纤维膜上，再与特定的带有放射性同位素标记的DNA（或RNA）片断杂交，Z后经过放射自显影等方法从X光底片上显现一条或多杂交分子区带，从而达到检测特定DNA片断的方法，后来把这种方法称Southern Blotting（Southern印迹）；随后于1977年，Alwine等八以上类似方法用于检测经琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳中分离的特定RNA，此方法又称为Northern Blotting（Northern印迹）；1979年Towbin等再将该方法扩展到特定的蛋白质检测或分析上，成为Western Blotting（Western 印迹）

PCR：（聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ，PCR）PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点，应带有标记的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、等非放射性物质)DAN或 RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸。(RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的 mRNA或DAN 的存在与定位；用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。 此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。