在核算分子杂交中为什么都使用碱变性而不使用酸变性
DNA可以用碱变性而RNA不能采用碱变性的原因:
因为DNA耐碱,而RNA中核糖的2‘羟基还在,可以在碱性条件下攻击磷酸二酯键,使其断裂。
碱变性法提取质粒DNA原理:
普遍采用的碱变性法具有操作简便、快速、得率高的优点。其主要原理是,利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在碱变性条件下(pH 12.6),染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,质粒DNA氢键也大部分断裂,双螺旋也有部分解开,但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离,当以pH 4.8的乙酸钠将其pH调到中性时,变性的质粒DNA又恢复到原来的构型,而染色体DNA不能复性,形成缠绕的致密网状结构,离心后,由于浮力密度不同,染色体DNA与大分子RNA、蛋白质SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。分离质粒DNA的方法一般包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离和纯化质粒DNA。