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生物学分子杂交中加入的封闭液为什么不会把膜上的探针也给封起来?

siyiyangli 2014-03-30
杂交过程中,封闭液起的是封闭作用,会把非特异位点封起来,但是封闭液怎么知道哪个是特异位点,哪个是非特异位点,怎么保证不会把特异性位点也给封起来?
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xiaofeitiandg
核酸杂交(southern或者northern)中常会用到鲑鱼精等DNA物质作为封闭液,和蛋白中的western、ELISA的原理类似,但不是一回事,更不会像一楼所说的那样用BSA去做核酸杂交。

封闭液所封闭的是膜或者说是背景,而不是靶标核酸分子,也就无所谓特异性封闭和非特异性封闭这个概念。封闭的目的是防止背景过深或者发生非特异性显色。

至于封闭液会不会把能与探针结合的位点封闭起来?我个人认为,可能有极微量的位点会被阻隔,但不影响Z终结果。
6 0 2014-04-14 0条评论 回复
沙漠之鹄
封闭液一般是牛血清蛋白(BSA)溶液,这是一种可溶性的白蛋白。它自然不能分辨特异与非特异位点。可是,非特异性位点一般是比较“黏”的位点,能够与包括抗体在内的乱七八糟的物质结合;为了防止探针或抗体结合到这样的位点上引起假阳性,就先用BSA将这些黏的位点阻断掉。
在核酸杂交中不用担心BSA阻断了特异位点(毕竟是DNA/RNA嘛,BSA上没有这些东西的结合位点);在抗原-抗体杂交中也许BSA会封闭特异性抗原位点,但是抗体经过筛选对抗原的选择性超过BSA,因此可以竞争性结合到特异性位点上。
希望有用~
16 0 2014-03-31 0条评论 回复
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