是通过什么原理实现分离的?正相和反相,改变流动相极性被分离物质的保留时间分别会发生什么变化?保留时间与被分离物质的极性、k、K等都有什么关系?... 是通过什么原理实现分离的?正相和反相,改变流动相极性被分离物质的保留时间分别会发生什么变化?保留时间与被分离物质的极性、k、K等都有什么关系?
简单地回答一下,你知道用粉笔吸墨水的原理吗?粉笔相当于色谱柱,墨水相当于被测物质,墨水可以被粉笔吸附,然后再用另外一种吸附性质较小的流动相来冲,利用墨水中不同成分被柱子吸附程度的不同,使吸附性质较小的成分被流动相较快冲走,而吸附性质较强的成分则在流动相的冲击下缓慢前行,利用这个原理将几种不同成分的物质进行分离。 答案补充 在条件(流动相、固定相、温度和压力等)一定,样品浓度很低时(Cs、Cm很小)时,K只取决于组分的性质,而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件,在这种条件下,得到的色谱峰为正常峰;在许多情况下,随着浓度的增大,K减小,这时色谱峰为拖尾峰;而有时随着溶质浓度增大,K也增大,这时色谱峰为前延峰。因此,只有尽可能减少进样量,使组分在柱内浓度降低,K恒定时,才能获得正常峰。
答案补充 在同一色谱条件下,样品中K值大的组分在固定相中滞留时间长,后流出色谱柱;K值小的组分则滞留时间短,先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大,越容易分离,因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。
答案补充 在HPLC中,固定相确定后,K主要受流动相的性质影响。实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH值,以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间,达到分离的目的。
容量因子(capacity factor,k)--化合物在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中的量之比。因此容量因子也称质量分配系数。
容量因子的物理意义:表示一个组分在固定相中停留的时间(t'R)是不保留组分保留时间(t0)的几倍。k=0时,化合物全部存在于流动相中,在固定相中不保留,t'R=0;k越大,说明固定相对此组分的容量越大,出柱慢,保留时间越长。
容量因子与分配系数的不同点是:K取决于组分、流动相、固定相的性质及温度,而与体积Vs、Vm无关;k除了与性质及温度有关外,还与Vs、Vm有关。由于t'R、t0较Vs、Vm易于测定,所以容量因子比分配系数应用更广泛
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