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怎样储存纯化蛋白质,4摄氏度和零下20度哪一种能长时间保存蛋白质活性?
richardcpx
2011-11-09
在一个老美的实验室打工,做的是病毒DNA在细菌内扩增后的蛋白质提纯。通常是用尿素提纯完以后,应该用什么温度储存更合适?求指点!
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George926798
尿素提纯?你做refold?纯化的蛋白应该液氮或者干冰乙醇速冻,然后置于-80 freezer。4度肯定不适合长期保存,而蛋白保存应该速冻,减少蛋白在慢速温度变化过程中的构象改变。-20也不足以维持蛋白的构象。
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2011-11-10
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zpzp78
Z好-80。为避免反复冻融,可根据用量分装。
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2011-11-10
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实施实事
我们一般是把蛋白质冻干以后在-20°保存,活性可以保持一年左右,
2
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2011-11-11
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fwjpdwfl283518
一般来说蛋白都放在-20℃冰箱里,有必要的话甚至要放到-80摄氏度,因为你在提纯的过程中没法做到无菌,因此提纯的蛋白液里肯定共有细菌的存在。而细菌在4°C中仍然是会活动的,这样它就会去水解蛋白质,辛辛苦苦提的蛋白也就质量下降。不信你可以把蛋白放在4度里过一个星期,拿出来臭了,臭了就说明降解了。
蛋白质因为其三级,四级结构复杂,一般不推荐反复冻融,这样可能极大损害蛋白活性。而且在保存时Z好加入一点BSA,一般0.1%左右即可。
希望能够帮到你~有问题一起讨论解决哦~
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2011-11-10
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a340244226
蛋白质纯化后保存不好的话,很容易失活,据一位有经验的老师建议,4度和-80度保存,-20度保存等于白搭,效果不会比4度好到哪里去,Z好是保存在-80度,据说是-80度保存一个月后活性下降一半吧,其他的会更快。自己没试过,这仅是我一位专业做蛋白老师给的建议。希望对你有帮助。
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2011-11-12
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