如何减少蛋白质分离纯化中减少蛋白质变性的机会

蛋白质变性影响因素：
1，一般温度高于60摄氏度持续一段时间会变性。不同蛋白耐受高温不同，具体问题具体分析。
2，高浓度有机溶剂，如丙酮，，巯基乙醇等。
3，含有蛋白酶环境会分解蛋白。
4，变性剂，如高浓度盐酸胍和尿素。，
5，盐溶液，在一定浓度盐作用下，会使蛋白中折叠在内部的疏水集团暴露而改变折叠结构。
6，pH值变化，强酸强碱条件下会破坏蛋白质结构。等电点时蛋白质沉淀。
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因此，克服和避开上述内容可以减少变性。具体措施：
1，控制温度，pH值。避开强酸强碱和等电点。
2，尽量减少和有机溶剂和变性剂的接触。
3，添加蛋白酶YZ剂，可以减少蛋白分解。
4，盐浓度适宜，不能太高。
5，增加NMSF，N-马来酰亚胺，去氧胆酸钠等抗氧化物质，可以防止蛋白被氧化变性。
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在分离纯化时，先要了解你蛋白质的性质，比如等电点
然后选择合适的PH（比如说IgG MAB 洗脱时适合ph为4-4.5），合适的盐离子浓度，合适的缓冲体系。另外你可以适当添加一些其他物质减少变性机会，比如山梨醇，蔗糖等。
一般如果说是过柱子的，那就推荐PH为3-5，盐离子浓度为0.1-0.5M，流速为0.3ml/min
具体的你多查一些文献看看