1.为什么一定要转膜，不能用SDS凝胶直接和抗体结合吗？
2.为什么用过一次抗体结合后，还要用抗抗体结合一次呢？不能就用一次抗体吗？
3.有没有一本专门讲述免疫印迹的书呢？
请回答的大侠务必提供参考资料哦。
1. protein在凝胶里边是不暴露在外的，而是在凝胶内的。你要是切过DNA胶，你就能明白。所以要transfer到membrane上以使其暴露于抗体；
2. 一抗制备，比方说兔子吧，你先给兔子喂一些你想要probe的蛋白，兔子就对这外源蛋白起免疫反应了，就产生抗体了。然后你让兔子流血，从血里边提取抗体。这个就叫一抗。这个一抗是和你要probe的蛋白特异性结合的，没错吧。但是你怎样用你自己的眼睛来看这个特异性识别呢（"显色"）。这就需要二抗了。二抗就能和一抗特异性结合（一般要是兔子产的一抗，就用anti-兔子的二抗；老鼠的就用老鼠的。）为啥二抗能显色，take home for you， 就是想想为啥二抗会显色^^； 总之，一抗是和靶蛋白特异性结合；二抗和一抗结合以此来显色。
3. 你看wiki就足够了（英文版）。
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richardcpx 
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