求助: 钼蓝比色法测定磷浓度

　　1．原理
食物中的有机物经酸氧化分解时，磷在酸性条件下可与铝酸铵结合生成磷钼酸铵。对苯二酚、亚硫酸钠可将磷钼酸铵还原成蓝色化合物——钼蓝。通过分光光度计在波长660 nm处测定钼蓝的吸光值，可以测定磷的含量。反应式为：
H3PO4+12(NH4)3MoO4+2lHNO3一(NH4)3PO4·12MoO3+21NH4NO3+12H2O
2．仪器
分光光度计。
　　北京标准物质 国家二级标准物质 食品安全检测 农残检测标准物质
3．试剂
①硝酸(G．R)，高氯酸(G．R)。
②混合酸消化液：硝酸+高氯酸按4+l混合。
③15％硝酸溶液：取15 mL硫酸缓慢加入到80 mL水中，并定容至100 mL。
④50 g·L -1钼酸铵溶液：取5 g钼酸铵，用15％硫酸溶液稀释至1.0 mL。
⑤对苯二酚溶液：取0.5 g对苯二酚于100 mL水中，溶解后加一滴浓硫酸。
⑥200 g·L -1亚硫酸钠溶液(不稳定，应在每次实验前临时配制)：称取20 g亚硫酸钠溶于100 mL水中。
⑦磷标准贮备液：称取已在105℃下干燥2 h的KH3PO4(优级纯)0．4394 g溶于水中，并稀释至1 000 mL，浓度为1.0µg·mL -1。
⑧标准中间液的配制：吸取l mL磷标准贮备溶液，然后移人1.0 mL容量瓶中，用去离子水定容至100 mL，浓度为10µg·mL -1。
4．操作步骤
①样品消化：实验操作需在无元素污染的环境中进行。准确称取样品干样0.3～0．7 g，湿样1．0 g左右，饮料等其他液体样品1．0～2．0 g，然后将其放入50 mL消化管中，加混合酸15mL(注意：油样或含糖量高的食品可多加些酸)，过夜。次日，将消化管放人消化炉中，消化开始时可将温度调低(约130℃左右)，然后逐步将温度调高(Z终调至240℃左右)进行消化，一直消化到样品冒白烟，液体变成无色或黄绿色为止。若样品未消化完全可加几毫升混合酸，直到消化完全。消化完后，放凉，再加5 mL，去离子水，继续加热，直到消化管中的液体约剩2mL左右，取下，放凉，然后移至10 mL试管中，再用去离子水冲洗消化管2～3次，并Z终定容至10mL。
　　名词解释

　　钼蓝比色法
　　钼蓝比色法即为将油质样品与金属氧化物灰化，试样中的磷成为磷酸盐，加酸溶解而得磷酸根，在加入钼酸盐后生成磷钼酸盐，磷钼酸盐被还原而产生钼蓝，其颜色深浅与油脂中磷脂含量成正比关系，由此可进行比色定量。该法具有简便、准确、灵敏度高的特点。重量法就是将含磷有机化合物用浓硫酸和浓硝酸混合物分解，使磷变成为正磷酸根离子，在将后者转化成为磷钼酸铵沉淀称量。

使用酒石酸锑钾是很久以前的方法了，硝酸铋也曾见过，但少于酒石酸锑钾。我们上世纪70年代后一直使用氟化钠-氯化亚锡-VC法，效果很好，建议你不妨一试。氟化钠-氯化亚锡-VC溶液的配制：1000ml水，先溶解2gNaF，然后溶2gSnCl2，再加入2gVC，在加入钼酸铵后立即加入，稀释至刻度摇匀后尽快比色。氟化钠-氯化亚锡-VC溶液要现用现配，也可先配好NaF溶液后存放于塑料瓶中备用。