ELISA实验中，夹心法和竞争法的区别是什么？

双抗体夹心法是检测抗原Z常用的方法，操作步骤如下:
1) 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体.洗涤除去未结合的抗体及杂质.
2) 加受检标本，保温反应.标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物.洗涤除去其他未结合物质.
3) 加酶标抗体，保温反应.固相
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复合物上的抗原与酶标抗体结合.彻底洗涤未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关.
4) 加底物显色.固相上的酶催化底物成为有色产物.通过比色，测知标本中抗原的量.在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg，HBeAg，AFP，hCG等.只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体Z好分别取自不同种属的动物.如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物.这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测.
在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物".类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2，图1-4)，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应(hook effect)，因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落.钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常的物质(例如血清中HBsAg，AFP和尿液hCG等)时，应注意可测范围的Z高值.用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应.
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物.但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr，adw，ayr，ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题.
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰.RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应.采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标(参见6.2).
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心.
2.2 双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似.用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体.与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体.此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法.乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法.本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法.
竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合.标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应.如抗原为高纯度的，可直接包被固相.如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原.洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应.竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法.另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应.抗HBe的检测一般采用此法.
2.5 竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式.其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合.标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，Z后的显色也愈浅.小分子激素，药物等ELISA测定多用此法.