不同的色谱柱有不同的测试方法,来自不同厂家的同类色谱柱也往往采用不同的测试条件,所以Z好按照色谱柱说明书中的测试报告测定柱效。一般工作站的数据处理都有自动计算柱效的功能,若没有工作站,可由公式计算:柱效(理论塔板数)等于保留时间与峰宽的比值的平方再乘以16,或保留时间与半峰宽之比值的平方再乘以5.54。
测定柱效时,不要接保护柱,同时注意连接的管路尽可能短,以减少死体积。
自己测定的柱效有时会低于出厂时测试报告给出的值,因为一般情况下,应用实验室没有专门用于测试柱效的仪器。当然,使用了一段时间的色谱柱的柱效是会下降的。
作为一个例子,下面给出Sepax的参考测试条件可用于C18(C8)柱效的测定。
流动相:乙腈/水(65:35)(v/v)
流速:1.0mL/min
检测波长:254nm
测试样品:Aniline(0.1%),Anisole(0.2%),Toluene(0.5%)(v/v)
进样体积:2.0uL