为什么我测的3'utr 突变载体的荧光素酶比值高于1

目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver-1，PRL-1)3’端非翻译区(3-untranslatedregion，3’UTR)构建PRL-1荧光素酶报告基因载体及突变体，为研究miR-339-5p在结肠癌中调控其靶基因PRL-1提供有效的工具。方法 PCR扩增包含PRL-1的3’UTR的DNA片段，克隆至荧光素酶载体psiCHECK-2，构建psiCHECK-2/PRL-13’UTR载体;经双酶切及测序鉴定后，对psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR重组质粒"种子区"的7个碱基进行定点突变，构建psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR突变载体。结果克隆获得的psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR载体中DNA片段大小及序列与GenBank报道的一致，且插入方向正确。"种子区"的7个碱基定点突变成功。结论成功构建了含PRL-1基因3’UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体，可用于后续功能研究。