如何确定是外显子突变或者基因拷贝扩增

应用基因扫描法检测人表皮生长因子受体（EGFR）基因19外显子缺失突变。方法：（1）将EGFR基因19外显子缺失（delE746-A750）型及野生型基因分别克隆到T载体，并将含突变型基因及含野生型基因的载体按l：1、1：5、1：10、1：50、1：100、1：300的比例进行混合，用基因扫描法检测19外显子的缺失．以确定其灵敏度。（2）基因扫描法检测225例非小细胞肺癌患者的手术组织或穿刺标本；荧光标记EGFR基因19外显子的上游引物，PCR扩增目的片段，3100A测序仪进行基因扫描，Gene Scan Genotyper3．5软件分析结果。同时用直接测序法检测EGFR19外显子的缺失突变。结果：（1）基因扫描法可测出1：100混合液中的突变型，灵敏度较高。（2）225例肺癌标本，可检测出27例（12．0％）缺失；直接测序法则检出25例（11．5％）缺失突变。结论：基因扫描法检测EGFR基因19外显子的缺失，方法简便，成本低廉，敏感度高，可查出1％的突变。