hifidna聚合酶退火温度68℃为什么pcr扩不出来

在引物没有试验过，PCR条件没确定的情况下，建议用梯度PCR仪确定退火温度。2.有阳性模板的情况下设立阳性对照。（成功的pCR结果，稀释1000倍就可以）建议每次都设立。3.模板的问题。（和样品有关，有一定的可能）4.引物设计和模板不匹配。因为引物可能是简并引物，特异性较差。或分离的菌株同标准菌株的序列有所差异。5.极端的解决办法是胶回收PCR产物条带。以其为模板再扩增。然后测序。（实在没办法时，可以尝试） 或在PCR目的片段内再设计一段截短的片段，以PCR结果为模板做二次PCR
应该是非特异。不过特异性太差了，根本分不清条带。。。先跑个退火的梯度吧。要不就做降落PCR试试。PCR条件优化有时很费时间的。退火温度有时差1度，天壤之别呀。还有下次这种图可以用反转片看，白背景黑条带更清晰些。