原代细胞复苏基本技术介绍在哪些生物论坛有介绍

原代细胞复苏基本技术 1、从液氮容器中取出原代细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入37℃水浴中，在1-2分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。 2、用75%酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液，接种到细胞培养瓶中，5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养。 你可以去生物帮那里了解，这是一个生物行业门户网站，生命科学领域产品、技术文档、视频资源丰富，而且还可以在线问答，帮助你解决遇到的问题。 注：不推荐刚解冻后的细胞悬浮液离心。 3、另外，细胞计数，确定细胞数量。 4、24小时后，更换一次1/2原代细胞培养液，继续在5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养 。 注意事项 1、将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。 2、取冻存管后立即放入37oC水浴中，缩短解冻时间。 复苏Z好用新配制的原代细胞培养体系。 可 参考： IT can help you.Click www.bio1000.com/experiment/cell/Cellculture.html， Sign in account. 原代细胞培养生长减慢原因： (1)原代细胞培养基和添加基的配置或选购不当; (2)胎牛血清质量不高或保存不当; (3)缺乏或已被破坏细胞生长必需成分：如谷氨酰胺、生长因子; (4)细菌或真菌等微生物污染; (5)培养条件不正确如温度、湿度、CO2浓度; 原代细胞培养体系、微生物污染、培养条件三种因素。 因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++， Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下pH8.0、温度37°C其作用能力Z强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为： (1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA; (2)0.25% 胰蛋白酶 多数细胞传代消化可使用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA这种消化液。