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急求:做鼠细胞培养实验的具体步骤

123黄梅芬芳 2011-03-14
Z好是鼠肝细胞或者肺细胞。。。。。越详细越好。。。谢谢!!在线等。。。。。。。
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windy张漾
原代细胞培养吗?
你看看这个:
1. 组织修剪、漂洗:修剪去除血管等杂组织,D—Hanks液中漂洗数次,以除去血块等。
2. 剪切:将心室肌用锋利的眼科剪反复剪切组织至剪成1~2mm3小块,在剪切过程中,可以适当向组织中滴加1~2滴培养液,以保持湿润。
3. 消化:将组织小块转移至100ml的玻璃瓶中,再加入30~50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液,37℃摇床消化6min左右。
4. 细胞分离:消化完毕,用吸管轻轻吸吹几下,使组织小块散开,静置2min后,吸取上面的混悬液(弃去第1次的混悬液),经140目尼龙网膜过滤至盛有终止液试管中,1000rpm,离心10分钟,弃去上清,加适量的培养液悬混。在装有组织小块的玻璃瓶中再加入30~50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液,重复第4、5步骤,直至大部分组织小块消失。
5. 细胞计数:将上述获得的细胞悬液,吸出少许,适当稀释,加台盼蓝溶液染色,用红血球计数板计数活细胞和死细胞,计算细胞密度和存活率。
6. 细胞接种:将细胞接种至30ml的培养瓶中,每瓶6×105,用含15%小牛血清的DMEM培养液培养。
7. 培养:5%CO2、37℃培养箱培养12h,显微镜下可见细胞贴壁,呈多角形,培养24h,镜下见细胞已连结在一起,部分细胞开始搏动。
8. 换液:培养3~5d,细胞换液。
8 0 2011-03-15 0条评论 回复
初见丶雪星
好久没看书了,具体我忘了
百科中查的,记得大致是这样
取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或用胶原蛋白酶)处理(消化),处理形成单个细胞,将单个的细胞放入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,成为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触YZ。此时需要将出现接触YZ的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外,原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大以后,科学家接着进行传代培养,即将原代培养细胞分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法,从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。当培养超过50代时,大多数的细胞已经衰老死亡,但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性,即癌变。此时的细胞被称为细胞系。
3 0 2011-03-15 0条评论 回复
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