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多少周icr小鼠超排然后合笼取体内胚胎比较好

飞地我彼8150 2016-09-21
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廖冰6
1材料和方法 1.1材料ICR和C57BL/6小鼠.所有实验用小鼠均在SPF动物房饲养,温度控制在℃,光控,自由采食.Co60灭菌饲料;孕马血清,46~48h后给供体鼠注射hCG,hCG注射当日下午和雄鼠合笼,次日6:30~8:00检查雌鼠有无阴栓以判定是否已经交配. 1.2.1.2受体鼠的预备实验开始前提前预备输精管结扎雄鼠,挑选至少两次和雌鼠交配后都不能使其受孕的结扎雄鼠备用.实验第3日下午合笼受体鼠和结扎雄鼠,次日06:30~08:00检查雌鼠有无阴栓以判定是否已经交配,交配成功的雌鼠作为胚胎移植的受体鼠. 1.2.1.3受精卵的收集处死供体鼠,打开腹腔,取出输卵管.将输卵管置于M2培养液中,用小镊子撕开输卵管膨大部,可见有卵团溢出,用吸管〔5-6〕将卵团转移至含有透明质酸酶的M2培养液滴中,吹吸数次,洗掉卵细胞四周的泡沫细胞.将受精卵转移至含有M16培养液滴的培养皿中,37℃,50mL/LCO2培养箱内短暂培养. 1.2.2胚胎移植方法将106只受体雌鼠随机分为两组,其中一组采用传统的胚胎移植方法〔4〕;另一组采用改进的胚胎移植方法. 1.2.2.1传统的胚胎移植方法〔4〕用水合氯醛麻醉受体鼠,沿受体鼠背部中线Z后一根肋骨水平切1cm左右切口,轻轻拨开切口,可见位于卵巢上方的白色脂肪垫.用小镊子夹住白色脂肪垫将其拉到体外,用小血管夹夹住,并靠其重力起固定作用,以防输卵管缩回体腔.用移卵管吸15~20个受精卵预备移植.将小鼠转到解剖镜下仔细寻找到输卵管.可见输卵管被一层呈半透明的囊膜所包绕,将囊膜撕破而暴露输卵管,将移卵管内受精卵移植到输卵管膨大部.
2 0 2016-09-22 0条评论 回复
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