软琼脂克隆形成实验加药处理怎么做

软琼脂克隆形成实验加药处理怎么做
1).细胞培养至70%贴壁时准备试验，试验前夜更换培养液； 2). 称取两份1g 低熔点琼脂糖胶，分别置入新鲜制备的MiliQ水，配成10%和2%，高压灭菌，维持于40℃勿使冷却凝固； 3). 取少量含10%FBS的RPMI1640培养液，预热至37℃； 4). 将维持于40的10%低熔点胶溶液按10:1比例与预热至37℃RPMI1640培养液混合，取5ml，置入直径为6cm的无菌培养皿中，冷却凝固，至于37℃，5% CO2培养箱中备用； 5). 将培养中细胞用0.25%胰酶消化成单个细胞，20℃ 800′g离心15min，轻轻倒掉上清； 6). 用少量10% FBS＋RPMI1640 将细胞吹打悬起；计数；稀释500 cell/ml； 7). 将维持于40C的2% 低熔点胶溶液按10:1比例与细胞悬液混合，充分混匀后取2ml注入步骤4).中制备的底层琼脂糖上； 8). 待加入的琼脂糖凝固后，置于37℃，5% CO2培养箱中； 9). 将维持于40的2% 低熔点胶溶液按10:1比例与10% FBS＋RPMI1640混合，充分混匀后取1ml注入步骤7).中制备的琼脂糖上； 10). 待加入的琼脂糖凝固后，再加入5ml10% FBS＋RPMI1640； 11). 置于37℃，5% CO2培养箱中培养7天；转化的LA795（MAGE-A3）细胞和LA795细胞各作3份； 12). 观察形成的细胞集落；并计数克隆形成率： 13). 两组细胞克隆形成率，以配对样本的秩和检验作统计分析；以SPSS 10.0辅助计算；P＜ 0.05视为差别有显著性的依据；