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测DNA含量绘标准曲线时,怎么算DNA的浓度

lyg0960 2017-07-11
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guokui0564
测DNA含量绘标准曲线时,算DNA的浓度的方法:先把标准品的浓度和每个标准品的吸光度用Excel生成标准曲线,同时得到公式。测量每个样本的吸光度。把吸光度代入公式,计算出对应的浓度.如果样本有稀释,还要乘以稀释倍数。DNA及RNA含量测定方法:取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。 用lml水做空白。把样品杯放在分光光度计比色槽上。 每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍,例如稀释后样品在260nm处OD值为0.2,则原DNA或RNA样品浓度为2ug/ul。 如果想要检测样品的纯度,那么还要再测一次280nm处OD值,计算二者的比率,若比率接近2,则说明样品中核酸比较纯。若比率小于1.6,则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中,建议再用酚/氯仿抽提继以乙醇沉淀以除去杂质。 如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质,那么还要测定一次230nm处OD值。 
16 0 2017-07-12 0条评论 回复
SHU幽幽WEI
之前做实验,朋友介绍了一款AAT Bioquest 的DNA浓度计算器,用着很方便 ,推荐给你
DNA浓度计算器 介绍:通过分子量、消光系数、和λmax带入Beer-Lambert定律的派生形式,可以确定溶液中DNA的浓度。物质的入max是其经历Z强吸光度时的波长。对于DNA,这个波长是260nm。 Nucleotide:核苷酸。可以选三种,dsDNA(单链DNA)、ssDNA(双链DNA)、自定义Dilution factor (optional):稀释倍数Pathlength:路径长度 注意:DNA应该溶解在溶液中,DNA沉淀将导致浓度计算不准确。吸光度读数不应超过仪器的Z大检测限。这可以通过吸收光谱中的平台来确定。如果吸收光谱平稳,稀释样品可以再尝试一次。该计算器设定仪器的光程长度为1cm。用于分光光度计的标准比色皿(通常为1cm)。如果使用不同路径长度,则应在数据输入过程中更正数值。 使用说明:选择核苷酸或选择自定义序列进入核苷酸序列在λmax处输入吸光度。对于典型的核苷酸,λmax是260nm,但这个值可能会根据核苷酸而改变。请使用分光光度计读数所示的Z大吸光度(即Z高峰)如果用稀释样品获得吸光度,请输入稀释因子以确定原始样品浓度如果路径长度与1cm不同,请将更正后的数值输入λ光程文本框按“计算”显示浓度 https://www.aatbio.com/tools/calculate-DNADNA浓度计算器   介绍:通过分子量、消光系数、和λmax带入Beer-Lambert定律的派生形式,可以确定溶液中DNA的浓度。物质的入max是其经历Z强吸光度时的波长。对于DNA,这个波长是260nm。 Nucleotide:核苷酸。可以选三种,dsDNA(单链DNA)、ssDNA(双链DNA)、自定义Dilution factor (optional):稀释倍数Pathlength:路径长度   注意:DNA应该溶解在溶液中,DNA沉淀将导致浓度计算不准确。吸光度读数不应超过仪器的Z大检测限。这可以通过吸收光谱中的平台来确定。如果吸收光谱平稳,稀释样品可以再尝试一次。该计算器设定仪器的光程长度为1cm。用于分光光度计的标准比色皿(通常为1cm)。如果使用不同路径长度,则应在数据输入过程中更正数值。 使用说明:选择核苷酸或选择自定义序列进入核苷酸序列在λmax处输入吸光度。对于典型的核苷酸,λmax是260nm,但这个值可能会根据核苷酸而改变。请使用分光光度计读数所示的Z大吸光度(即Z高峰)如果用稀释样品获得吸光度,请输入稀释因子以确定原始样品浓度如果路径长度与1cm不同,请将更正后的数值输入λ光程文本框按“计算”显示浓度 
 
11 0 2018-07-27 0条评论 回复
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