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请教提取凝血块中基因组DNA和精液中DNA的试剂盒

sswwffq 2017-04-04
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yangle406
血液基因组DNA提取试剂盒
操作步骤:
一、小体积全血操作步骤如下: <400ul全血,以300ul血液处理量为例
1、向300ul抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A,颠倒混匀,12000rpm离心1分钟,弃掉上清。
2、再重复步骤1一次,弃掉上清。
3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液(Solution B与Solution C的使用量见附表)。
4、加入150ul混合液,用移液器吹打均匀,60℃水浴或孵箱孵育10分钟,孵育期间颠倒混匀一次,溶液由红色变为黄绿色或棕色。
5、加入等体积的异丙醇,充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA,12000prm离心1分钟,弃掉上清。
6、加入800ul 75%酒精,颠倒数次;12000prm离心1分钟,用移液器吸掉上清,室温干燥10~15分钟。
7、加入150ul Elution buffer,60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA,用移液器吹打均匀,-20℃保存基因组DNA。
二、中量全血操作步骤如下: 1~10ml血量,以3ml血液处理量为例
1、向3ml抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A,颠倒混匀,3000rpm离心5分钟,弃掉上清。
2、再重复步骤1一次,弃掉上清。
3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液(Solution B与Solution C的使用量见附表)。
4、加入1.5ml混合液,用1ml移液器或者一次性塑料吸管吹打均匀,60℃水浴或孵箱孵育10分钟,孵育期间颠倒混匀一次,溶液由红色变为黄绿色或棕色。
5、加入等体积的异丙醇,充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA。
6、用移液器将絮状物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中,颠倒数次,12000prm离心3分钟,弃掉上清,室温干燥10~15分钟。
7、加入500ul Elution buffer,60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA,用移液器吹打均匀,-20℃保存基因组DNA。
三、大量全血操作步骤如下: 10~20ml血量,以10ml血液处理量为例
1、向10ml抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A,颠倒混匀,8000rpm离心5分钟,弃掉上清;
2、再重复步骤1一次,弃掉上清。
3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液(Solution B与Solution C的使用量见附表);
4、加入5ml混合液,用一次性塑料吸管吹打均匀,60°C水浴或孵箱孵育10分钟,孵育期间颠倒混匀一次,溶液由红色变为黄绿色或棕色。
5、加入等体积的异丙醇,充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA;
6、用移液器将絮状物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中,颠倒数次,12000prm离心1分钟,弃掉上清,室温干燥10~15分钟;
7、加入1000ul Elution buffer,60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA,用移液器或一次性塑料吸管吹打均匀,-20℃保存基因组DNA。
1 0 2017-04-05 0条评论 回复
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