目前公认能够精确测定血铅水平的仪器和方法有:Z常用的是阳极溶出伏安法(ASV)和石墨炉原子吸收光谱法 (GFAAS)。
等离子体质谱ICP-MS虽然可精确测定血铅含量,但因成本太高,不适合做日常分析,只有一些专业实验室才拥有这种设备。
阳极溶出伏安法(ASV)作为成功测定血铅浓度的检测方法,在国外应用已有30年多的历史。用阳极溶出伏安法分析血铅是在1971年提出,其后显示出它在微量测定中特有的优势。血液中的铅离子,经试剂处理,释放成游离的铅离子,当在电极中施加一定的负电压时,所有的铅离子将被还原成铅且附着在电极上,然后再在电极上施加更正的电压,电极上的铅再电离成的铅离子,并释放一定的电子,产生电流信号。此电流信号与溶液中铅浓度成比例关系,从而测定出铅离子的浓度。
美国ESA公司生产的3010B型血铅分析仪使用的是转换法,即用含(CH3COO)2Ca、CrCl3、Hg2+ 置换血蛋白中的2价铅离子,其主要优势在于分析速度的提高,并可以得到比较可靠的结果。美国CDC项目的几项比较结果显示ASV和GFAAS的一致性很好。
石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)是目前国际上公认的检测血铅的标准方法之一。但石墨炉原子吸收光谱受光散射和分子吸收的影响较大,此方法规定必须用塞曼背景修正系统,并保证用于分析铅的波长稳定在283.3nm。而且此方法对样品处理和工作环境的要求很苛刻,在操作时要注意以下几点:
1. 在采血和对血样进行处理过程中,由于血样是完全暴露在环境中,因此一定注意环境中的铅污染血样(如空气中微粒带来的铅污染、使用了被污染的器具)。
2. 在采血后对血样进行硝化,硝化的作用是去除血液里的纤维素,使铅以游离态的形式存在于溶液中。处理过程中如使用的硝酸本身的铅含量就很高,甚至会高于血样的铅含量,因此有必要在使用硝酸对血样进行硝化处理前先检测硝酸的铅含量并采取措施降低硝酸的铅的含量,避免血样的二次污染,假阳性的出现。
3. 在使用塞曼效应石墨炉原子吸收光谱来测定血铅时必须要有专业技术人员来完成此操作过程。
火焰原子吸收光谱法(AAS)用火焰原子吸收法做人体血铅含量分析是一种旧的技术,由于对人体产生影响的血铅是微量的,使用火焰原子吸收光谱,铅的原子化率是非常低的,即在实际操作中表现为基线漂移非常严重。因此它的灵敏度是达不到检测人体血铅的检测范围,有可能出现假阴性结果。火焰原子吸收在操作上受外部因素影响较严重,尤其是人为因素的影响,不同的人操作可能会得到不同的结果。同时,由于在处理血样的过程中是完全暴露在环境(如空气中微粒带来的铅污染、使用了被污染的器具)中和血样进行硝化处理过程中使用的硝酸本身的铅含量过高,因此可能造成对血样的二次污染,会造成儿童实际血铅水平较低而测量结果较高,即假阳性现象出现。此方法基本上已被石墨炉原子吸收法所取代。
红细胞原卟啉法(EP)也称为锌卟啉法(ZPP)曾经作为无症状儿童和其他高危人群的铅筛查手段。有数据表明,锌原卟啉法(EP/ZPP)并无足够的灵敏度和准确度测定低浓度的血铅含量,因而不再用于血铅筛查。锌原卟啉法测定是用于说明由于锌取代了在卟啉环中的铁引起原卟啉含量(而此原因是由于铅YZ了线粒体中的铁络合酶引起的)的一种方法。原卟啉只有在所有的循环的红细胞完全更新后才能达到稳定的水平,而达到此水平需要的时间为120天,且原卟啉的半衰期(68天)要比血中的铅的半衰期(28-36天)要长。锌原卟啉法并不能表明检测期血铅的含量,而只是一种对中度血铅含量的间接的估计。依据大量的研究结果表明:锌卟啉的含量通常低于35μg/dL,体内新增的原卟啉的浓度和血铅水平只有在30-80μg/dL才成比例(PorruAlessio 1996)。在血铅浓度为10μg/dL-30μg/dL时,用EP法检测,其诊断的灵敏度和精度都是非常低的。而这一血铅水平已明确对儿童健康有害。因此锌原卟啉法的灵敏度不足以测定低血铅水平中的铅暴露状况,所以用EP法检测会造成儿童实际血铅水平较高而测量结果较低,易引起假阴性的结果。在黄疸及缺铁性贫血症,镰形血球及其他溶血性贫血症病人中,EP值会升高,易引起诊断上的假阳性。所以,此方法在应用于儿童血铅的检测上在国外已被禁止,见CDC的1991版“防止儿童铅中毒(Preventing Lead Poisoning in Young Children)”及美国卫生和人类服务部有毒物质和疾病注册处健康教育和促进分部“铅的毒害(Lead Toxicity)”一书(2000年10月改版本)。