生长谱法在微生物育种和营养缺陷型鉴定中有什么应用

营养缺陷型（auco troph）：因丧失合成某些生活必需物质的能力，不能在基本培养基上生长的，突变型菌株.营养缺陷型auxotroph 指微生物等不能在无机盐类和碳源组成的合成培养基中增殖，必须补充一种或一种以上的营养物质才能生长.一如胸间氮苯缺陷型所表现的那样.另外对这样的性质则称为营养缺陷性（auxotrophy）.营养缺陷型是作为原养型的对应词来使用. 　　营养缺陷型式微生物遗传学研究中重要的选择标记和育种的重要手段，在发酵工业上有广泛用途.
营养缺陷型的鉴定
（1）营养缺陷型鉴定步骤
　A、缺陷型类别的测定
通常分别用以下物质来代表氨基酸、维生素、核酸碱基：
①氨基酸混合物、酪素水解物或蛋白胨，代表氨基酸类
②酵母浸出液，基中氨基酸、维生素、嘌呤、嘧啶均有
③维生素混合物，代表维生素类
④核酸碱基混合液，代表嘌呤、嘧啶类.
将待测微生物从斜面上用生理盐水或缓冲液乔洗下来，离心洗涤，制成浓度为106~108ml-1菌悬液，取0.1ml加入到基本培养基中，混匀倒入平皿，制成平板.凝固后，用加圆滤纸分别浸湿沾取以上四类代表物质，覆于平板标定的位置上.培养后，观察圆滤纸片周围菌株生长情况，如出现混浊的生长圈，就可初步确定缺陷型所需的生长因子属于哪一类别，进一步复证.
B、缺陷型所需生长因子的测定
在同一平皿上测定一种缺陷型菌株对许多种生长因子的需求情况，称为生长谱法.
单一生长因子：鉴定氨基酸或维生素的营养缺陷型，较为简便的方法是分组测定法.将21种氨基酸，组合6组，每6种不同氨基酸归为一组.如果以15种维生素进行测定，则把5种维生素归为一组，共5个组合.
组别
氨基酸组合组
1
赖氨酸
精氨酸
蛋氨酸
胱氨酸
亮氨酸
异亮氨酸
2
缬氨酸
精氨酸
苯丙氨酸
酪氨酸
色氨酸
组氨酸
3
苏氨酸
蛋氨酸
苯丙氨酸
谷氨酸
脯氨酸
天冬氨酸
4
丙氨酸
胱氨酸
酪氨酸
谷氨酸
甘氨酸
丝氨酸
5
鸟氨酸
亮氨酸
色氨酸
脯氨酸
甘氨酸
谷氨酰胺
6
胍氨酸
异亮氨酸
组氨酸
天冬氨酸
丝氨酸
谷氨酰胺

组别
维生素组合组
1
维生素A
维生素B1
维生素B2
维生素B6
维生素B12
2
维生素C
维生素B1
维生素D2
维生素E
烟酰胺
3
叶酸
维生素B2
维生素D2
胆碱
泛酸钙
4
对氨基苯甲酸
维生素B6
维生素E
胆碱
肌醇
5
生物素
维生素B12
烟酰胺
泛酸钙
肌醇

测定方法：缺陷型菌株和基本培养基混合制成平板，把5组或6组生长因子直接加于同一琼脂平板上，或用滤纸片沾取后覆于琼脂平板上，培养后，观察哪一组或哪两组区产生混浊生长圈，即可确定该菌株缺陷的生长因子.
如果要测定数十或上百个缺陷型菌株时，则可改成一个平皿中加入一种生长因子，制成平板，在翻转平皿底部，几十个方格子，把每株缺陷型按编号移接到琼脂平板格子中.培养后，根据混浊圈出现情况，则可确定哪些缺陷型菌株是缺这种生长因子的.

（二）、营养缺陷型菌株的应用
其在研究和实践中都有极其重要的意义.它可作为研究代谢途径和杂交、转化、转导、原生质体融合、质粒和转座因子等遗传规律所不可缺少的标记菌种；也可作为氨基酸、维生素、碱基等物质生物测定的实验菌种；在生产中，可直接用作发酵生产核苷酸、氨基酸等代谢产物的生产菌株；也可作为菌种杂交、重组育种和利用基因工程进行育种时所不可缺少的带有特定基因标记的亲本菌株.