如何使用牛津杯做YJ试验/药敏实验

一、实验原理
1、将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越大，离杯越远抗生素浓度越小。
2、在牛津杯周围YJ浓度范围内的细菌的生长被YZ，形成透明的YJ圈。
3、YJ圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度（药敏实验）或药物对指示细菌的YJ程度（YJ试验）。
4、抗生素浓度越高，YJ圈越大。
5、在YJ圈的边缘处，琼脂培养基中所含YJ物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的Z低YJ浓度（MIC） 。
6、YJ圈直径与药物对测试菌的Z低YJ浓度 呈负相关，即YJ圈愈大，MIC愈小。
二、实验材料
培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基
菌种：大肠杆菌（E.coli)、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)
药品：阿莫西林、黄芪多糖、
其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液枪、1mL、200uL枪头、恒温培养箱、超净工作台、接种环
“牛津杯”可从东台市吉泰不锈钢制品厂采购，牛津杯是内径为6mm，外径为8mm，高10mm的圆筒形管子，管子的重量尽可能相等。
三、实验操作
1. 倒平板：将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，倒在培养皿内，每皿约20ml，凝固。
2. 标记：菌种、牛津杯摆放位置、药物及其 浓度
3. 制备菌悬液：用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。
4. 菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布将菌液涂布均匀
5. 摆放牛津杯：在培养基表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。
6.加入待检药液：在杯中加入不同稀释度的药液或待检样品。
7. 孵育：加满后在37 ℃培养16~18 h。
8. 结果报告：用毫米尺量取YJ圈直径，参考表的标准判读结果，按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报
以牛津杯周围没有肉眼可见生长物区域为YJ圈，根据YJ圈直径大小判断细菌对KJ药的敏感性。
YJ试验结果判定标准：YJ圈直径（毫米）

能交流下几个问题呢？diyi，观察时间多长为合适？是不是不能让牛津杯里面的液体渗透完全？第二，对于你底层菌浓度，你采用的多少？