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从免疫学和分子生物学讨论现代生物技术在食品检测中的应用

c1enMS210 2008-11-16 22:38:56 521  浏览
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  • ndzshlhlij 2008-11-17 00:00:00
    好难啊..............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

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  • 林未汐 2008-11-20 00:00:00
    通过碱基互不配对原则,可以检验出食品中病毒

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  • D8观光团04 2016-11-20 00:00:00
      生物技术检测方法具有特异的生物识别功能、极高的选择性,它可与现代的物理化学方法相结合,产生一些简单、结果精确、灵敏、专一、微量和快速、成本低廉的检测方法,因此其在食品检验中占有越来越重要的地位。   在食品检验中应用的几种生物检测技术 1 免疫法   免疫法是Z灵敏的生物检测方法,具有高特异性和高灵敏性(灵敏度可达1ppb,1ppm)、操作简便、再现性好,应用前景看好。用免疫法可进行蛋白质检测,由于不同蛋白质的物理、化学性质差别极小,只能通过各种免疫方法或标记探针法加以区别。 (1) 荧光抗体法   将荧光抗体溶液滴加于固定的标本上,一定时间后用缓冲液冲洗,若有相应抗原存在,即与荧光抗体结合,在荧光显微镜下即可看到发荧光的抗体复合物。荧光抗体法在微生物污染鉴定中经常使用,Z常用于沙门氏菌的检测。 (2) 放射免疫法   灵敏度高,但操作相对复杂,放射免疫法同位素半衰期短,保存及操作不便。目前应用情况受到限制。 (3) 酶联免疫吸附法   是一种基本的酶免疫检测方法,其选择性好、灵敏度高、快速、易操作、结果判断客观准确、实用性强。酶免疫法和其他免疫法一样,都是以抗体和抗原的特异性结合为基础的。以酶或辅酶为标记物,标记抗原或抗体,用酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应。   酶联免疫吸附法除可检测食品中的毒素、残留农药及微生物外还可用于营养素的测定。 (4) 凝集反应法   当有电解质存在时,颗粒状的抗原与其特异性的抗体结合并生成可见凝集块的反应称为凝集反应,有直接反应和间接反应法。利用凝集反应可测定抗体的效价,也可用于细菌、病毒等的分类。 (5) 沉淀反应法   沉淀反应法常见的是一种琼脂扩散试验。单向扩散是利用不同抗原抗体在琼脂中不同的扩散速度而会在琼脂中出现几条相互分离的沉淀带。双向扩散则是利用抗原抗体都向中间层―――琼脂扩散而形成沉淀带,根据分离沉淀带的数量可确定抗原抗体种类。 (6) 免疫扩散法   利用蛋白质在半固体基质上的扩散作用,使抗原和抗体在浓度比例合适的部位产生沉淀带或沉淀环,从而检测蛋白质。如血清中IgG、IgA、IgM含量的测定。 (7) 免疫电泳法   免疫电泳法是将电泳和琼脂扩散沉淀反应相结合的一种方法,即先将血清或蛋白质抗原在琼脂凝胶中进行电泳。带电的蛋白质抗原向负极移动,加入抗血清后,不同区点的抗原再与抗体进行沉淀,当相应抗原抗体接触,在适当比例下形成弧形沉淀带,根据沉淀带的位置对蛋白质的各组分进行检测。如免疫球蛋白含量的测定。 2 酶检测法   酶检测法就是用酶来测定某些用一般化学方法难于检测的食品成分的含量或测定食品中某些特殊酶的活性或含量。其Z大特点就是特异性强。所以常用于分析结构和物理化学性质比较相近的同类物质的分别鉴定。如测定食品中残存有机农药的含量、微生物污染或了解食品的制备、保存情况。   酶检测法的样品一般不需要进行很复杂的预处理,由于酶的催化效率很高,反应条件温和,酶检测法的检测速度也比较快。常用的有以下方法: (1) 终点测定法   在以待测物质为底物的酶反应中,如果使底物能够接近完全地转化为产物,而且底物或产物又具有某种特征性质,通过直接测定转化前后底物的减少量、产物的增加量或辅酶的变化等就可以定量待测物质。 (2) 动力学测定法   在反应体系中精确加入一定数量的酶,测定反应物或产物变化的速度。测定的参数可以是吸光度、荧光度、pH值等。 (3) 多酶偶联测定法   当被测定的底物或反应产物没有易于检测的物理化学手段时,可采用两种或两种以上的酶进行连续式或平行式的偶联反应,使底物通过两步或多步反应,转化为易于检测的产物,从而测定待测物质的含量。例如葡萄糖的定量测定。 (4) 利用辅酶作用或YZ剂作用测定法   如果待测物质可作为某种酶专一的辅酶或YZ剂,则这种物质的浓度和将其作为辅酶或YZ剂的酶的反应速度之间有一定关联,因此通过测定该酶的反应速度就能进行这种物质的定量。嘌呤、核甙酸、维生素、辅酶及食品中农药、杀虫剂的检验可用此法。 (5) 通过酶反应循环系统的高灵敏度测定法   对于极微量的物质进行酶法检测时,由于灵敏度的原因,在很多情况下不能应用通常的终点测定法,可设计一个酶反应循环系统来提高检测灵敏度。 (6) 酶标免疫检测法   抗体与相应的抗原具有选择和结合的双重功能。若要测定样品中抗原的含量,就将酶与待测定抗原的对应抗体结合在一起,制成酶标抗体。然后将酶标抗体与样品液中待测抗原,通过免疫反应结合在一起,形成酶―抗体―抗原复合物,通过测定复合物中酶的含量就可得出待测抗原的含量。此法可用于食品的污染检测,尤其适用于毒素的快速检测。 (7) 放射性同位素测定法   酶的活性可以采用同位素标记的底物进行测量。经酶解后随时间所生成的放射性产物含量与酶的浓度成正比。也可用放射性同位素的底物在酶的作用下得到的产物,分离测定产物的同位素含量。此法可用于需要进行极微量的分析或因新发现的酶还未找到适当的分析法时的测定。 3 核酸探针技术   核酸探针技术又名基因探针技术或核酸分子杂交技术,具有敏感性高(可检出10-9―10-12的核酸)和特异性强等优点。两条不同来源的核酸链如果具有互补的碱基序列,就能够特异性的结合而成为分子杂交链。据此,可在已知的DNA或RNA片段上加上可识别的标记(如同位素标记、生物素标记等),使之成为探针,用以检测未知样品中是否具有与其相同的序列,并进一步判定其与已知序列的同源程度。   核酸探针技术已被广泛应用于进出口动植物及其产品的检验。用于检验食品中一些常见的致病菌及产毒素菌,如大肠杆菌、沙门氏菌等多种病原体的检验。近年来,放射性同位素标记的核酸探针正越来越多地用于产肠毒素性大肠杆菌的快速检测。 4 多聚酶链反应技术   多聚酶链反应技术是一种极敏感的分子生物学方法,是一项DNA体外扩增技术,在体外对特定的双链DNA片段进行GX扩增,故又称基因体外扩增法。   多聚酶链反应技术快速、特异、敏感,在食品中致病菌的检测方面具有很大的应用潜力。如可用于单核细胞增多症李氏杆菌、金黄色葡萄球菌、顽固性梭状芽胞杆菌、沙门氏菌等的检测。 5 基因芯片技术   基因芯片技术能同时将大量探针固定于支持物上,可以一次性对样品大量序列进行检测和分析,从而解决了传统核酸印迹杂交技术的操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足,是一种在生物技术产品检测中极有发展前景和应用价值的技术,也是近年来国内外研究的热点,基因芯片检测技术完全可能成为21世纪Z具活力的检测技术之一。   基因芯片检测技术可以判断该植物是否含有外来的基因序列,而鉴定该植物是否为生物技术作物。 6 免疫传感器   免疫传感器是根据生物体内抗原-抗体特异性结合并导致化学变化而设计的生物传感器,其主要由感受器、转换器和放大器组成。免疫传感器是多学科边缘交叉的产物,其研究涉及到电化学、物理、生物、免疫学和计算机等领域的相关知识。   免疫传感器主要有:酶免疫传感器、电化学免疫传感器(电位型、电流型、电导型、电容型)、光学免疫传感器(标记型、非标记型)、压电晶体免疫传感器、表面等离子共振型免疫传感器和免疫芯片等。   基于抗原-抗体特异性结合的工作原理,免役传感器在食品检测中的应用主要体现在对生物性危害的检测。如可用于致病菌、生物毒素、农药、兽药等的检测。

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浅析紫外线老化箱在现代汽车工业中的应用价值?
在现代汽车工业中,材料的耐久性和可靠性至关重要。紫外线老化箱作为一种重要的测试设备,对于确保汽车部件在长期使用中的性能稳定发挥着不可或缺的作用。以下我们将通过一系列提问和解答,深入探讨其应用价值。


一、为什么汽车部件需要进行紫外线老化测试?


汽车在日常使用中,暴露在各种环境条件下,其中紫外线辐射是导致部件老化和性能下降的重要因素之一。例如,汽车的外饰件如保险杠、扰流板、后视镜外壳等,长期受到阳光中的紫外线照射,容易出现褪色、裂纹、脆化等问题。通过紫外线老化箱的测试,可以提前评估部件材料的抗紫外线性能,为选材和改进设计提供依据。


二、紫外线老化箱如何模拟汽车使用中的实际环境?


紫外线老化箱能够精确控制紫外线的强度、波长分布、温度、湿度等参数,以尽可能接近汽车在不同地区和季节所面临的真实环境条件。此外,还可以设置循环模式,如干湿交替、冷热交替等,更全面地模拟复杂的气候条件对汽车部件的影响。


三、在汽车内饰方面,紫外线老化箱有何作用?


汽车内饰同样需要经受紫外线的考验,如座椅面料、仪表盘、中控台材料等。紫外线老化测试可以评估这些内饰材料在长期使用后的颜色变化、硬度变化以及是否会释放有害物质等,保障车内环境的舒适性和安全性。


四、对于汽车涂料和涂层,紫外线老化箱能提供哪些帮助?


汽车涂料不仅要美观,还需要具备良好的耐候性。紫外线老化箱可以检测涂料在紫外线作用下的光泽度保持、附着力变化以及是否会出现起泡、剥落等现象,有助于研发更优质的汽车涂料。


五、紫外线老化箱的测试结果对汽车生产企业有何决策意义?


测试结果可以帮助企业优化供应链,选择更可靠的材料供应商;在产品设计阶段,根据测试数据改进部件结构和材料选择,降低售后维修成本;同时,也有助于企业制定更严格的质量标准,提升品牌形象和市场竞争力。


综上所述,紫外线老化箱在现代汽车工业中具有重要的应用价值,为提高汽车的质量和可靠性提供了有力的技术支持。


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MBP标签:深度解析其蛋白大小、序列及其在生物技术中的应用

MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。

 

MBP标签序列:396 AA

 

纯化:融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲和力在微摩尔范围。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合,而其他融合蛋白则不受影响。缓冲条件为pH7.0到8.5,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂。如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。

 

 

mbp标签优缺点:

简单亲和纯化即可实现;

增加蛋白表达量和蛋白稳定性;

促进蛋白的可溶性和正确折叠;

标签较大,对蛋白的结构/功能会有一定影响。

 

常见的蛋白标签:

 

常见的融合标签包括谷胱甘肽S-转移酶 (GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、几丁质结合蛋白(CBD)、硫氧还蛋白(Trx)、链霉亲和素、多聚组氨酸(Poly-His)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)和血凝素标签(HA)。

 

GST:

 

GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解-毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为26KD。将它应用在原核表达的原因大致有两个,一个是因为它是一个高度可溶的蛋白,希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性;另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达,起到提高表达量的作用。GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达,可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况下,融合蛋白在水溶液中是可溶的,并形成二体。GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。在大多数情况下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。纯化:该表达系统表达的GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathionesepharose)亲和树脂进行纯化。GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱,因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力,因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如:盐酸胍或尿素等。如果要去除GST融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。检测:可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。

 

HA:

HA标签蛋白,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti-HA抗体检测和ELISA检测。用HA peptide可实现带HA tag的蛋白洗脱,0.15M Arginine-HCl缓冲液, pH3.0可实现蛋白纯化beads 的重生。

 

……

 

更多关于蛋白标签详情可以关注:https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag


2024-01-16 16:37:22 357 0
生物显微镜在食品检测中起哪些作用
 
2017-09-22 11:54:35 435 1
如何衡量紫外线老化箱在现代汽车工业中的实际应用价值?
在现代汽车工业中,紫外线老化箱作为一种重要的质量检测设备,其应用价值的衡量涉及多个方面。


首先,从产品质量保障的角度来看,紫外线老化箱能够模拟汽车在实际使用中所面临的紫外线辐射环境。通过对汽车零部件、外饰件、内饰材料等进行加速老化测试,可以提前发现潜在的质量问题,如材料褪色、脆化、失去弹性等。这有助于汽车制造商在产品投入市场前进行改进和优化,降低因质量缺陷导致的召回风险,从而节省大量的成本。因此,衡量其价值的一个重要指标是产品质量的提升程度以及召回事件的减少数量。


其次,从研发创新的角度分析。紫外线老化箱为汽车材料的研发提供了有力的支持。研发人员可以利用老化箱来测试新开发的材料和涂层在紫外线环境下的性能表现,从而快速筛选出更具耐久性和稳定性的材料。这加快了研发进程,缩短了新产品的上市时间。在这方面,衡量价值的关键在于新车型或新零部件的研发周期缩短程度,以及新材料和新技术的应用所带来的性能提升效果。


再者,从成本效益的角度考虑。虽然购置和维护紫外线老化箱需要一定的投入,但与因材料老化导致的售后维修成本、品牌声誉损失以及客户满意度下降等潜在损失相比,其带来的长期效益是显著的。通过准确评估老化箱在预防质量问题、减少维修费用和提升客户满意度方面所节省的成本,可以直观地体现其经济价值。


另外,从市场竞争的角度衡量。在消费者对汽车质量和耐久性要求日益提高的背景下,能够提供经过严格紫外线老化测试的汽车产品,有助于企业在市场中树立良好的品牌形象,增强产品的竞争力。通过市场份额的增长、品牌知名度的提升以及客户忠诚度的提高等指标,可以反映出紫外线老化箱在提升企业市场竞争力方面的贡献。


从可持续发展的角度来看,优质的汽车材料和部件能够延长汽车的使用寿命,减少资源浪费和废弃物的产生。紫外线老化箱在确保材料可持续性方面发挥了作用,其价值体现在对环境的保护和资源的有效利用上。


综上所述,衡量紫外线老化箱在现代汽车工业中的实际应用价值,需要综合考虑产品质量、研发创新、成本效益、市场竞争和可持续发展等多个方面的因素,通过量化的指标和综合的评估体系,全面准确地评估其对汽车工业的重要贡献。

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