本人在做蝴蝶兰花梗侧芽组培时,先用75%酒精浸泡10秒,无菌水洗2次,然后用3%的次氯酸钠浸泡12分,结果培养3天后发现有很多的细菌和霉菌污染,不知有什么好法灭菌?我想用氨苄青霉素浸... 本人在做蝴蝶兰花梗侧芽组培时,先用75%酒精浸泡10秒,无菌水洗2次,然后用3%的次氯酸钠浸泡12分,结果培养3天后发现有很多的细菌和霉菌污染,不知有什么好法灭菌?我想用氨苄青霉素浸泡一下外植体,不知此法可不可取?
我觉得可以尝试一下,理论上外植体对氨苄等抗生素会有一定抗性范围,做一些预实验分析出一个范围吧,或者适量加到培养基中。
在我接触过的3 种YJ性抗生素中对山茶的影响,羧苄青霉素促进愈伤组织诱导, 对愈伤组织的生长没有影响, 头孢霉素则有YZ作用, 而羟氨苄青霉素轻微YZ愈伤组织的生长, 但对愈伤组织的诱导影响不大。
消毒剂的的选择和消毒处理时间长短取决于植物材料对消毒剂的敏感性,越幼嫩或越敏感的植物材料处理时间不宜过长,也不宜采用强消毒剂。一般植物材料首先在消毒前除去泥土或死组织,然后用水冲洗除去外部污染物,然后剥除外层表皮或组织。
消毒时可先在70%酒精中浸泡数秒以除去空气气泡,用1.0%次氯酸钠消毒10~30分钟,或用0.1%消毒5~15分钟,之后用无菌水冲洗3~5次后接种。所用消毒液与外植体体积大致为1比10。
我觉得你可以试一下,我们一般都用它。
有时为了增强消毒效果,可以采取以下一种或几种办法:
将植物材料在灭菌前用十分清洁的流水(或自来水)冲洗0.5~2小时,在消毒剂中加入1滴或数滴吐温-20或80(浓度为0.08%~0.12%),在消毒过程中不时搅拌或振荡,在真空中进行消毒,多种消毒剂多次消毒处理或复合消毒处理,采用杀虫剂和杀菌剂进行表面消毒处理或适量地加入培养基。