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紫外-可见分光光度计中不同的光谱带宽分别应用在哪些行业?
紫外-可见光分光光度计在生物科技中可用于测定核酸和蛋白质的浓度。
首先,核酸的基本结构单位是核苷酸。核苷酸由一个含氮碱基(嘌呤或嘧啶),一个戊糖(核糖或脱氧核糖)和一个或几个磷酸组成。由于核酸的碱基具有共轭双键,因而有紫外吸收的性质。各种碱基、核苷和核苷酸的吸收光谱略有区别。核酸的紫外吸收峰在260nm附近,可用于测定核酸。根据260nm与280nm的吸收光度(A260)可判断核酸纯度。
再谈蛋白质,构成它的组成是氨基酸,其中的种类包含酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸,这几种芳香族氨基酸的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。所以,紫外吸收法是280 nm 的光吸收法,含有核酸的蛋白质溶液使用280 和260 nm 的吸收差法较好。蛋白质的稀溶液采用215 与225 nm 的吸收差法。
此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。
还有一些测定蛋白质的方法,是通过蛋白质与一些物质的作用产生颜色,然后在此有色光光谱内测定吸光度。将已知浓度的蛋白质溶液稀释几个倍数,与物质作用后作为标准品,测定吸光度做出一条曲线,然后未知溶液的浓度就可通过吸光度来得出。这些方法包括,凯氏定氮法,考马斯亮蓝法(Bradford),Folin-酚试剂法(Lowry法)和BCA法。