提取pet28质粒时，怎样才能得到高的浓度

提取pet28质粒时，怎样才能得到高的浓度
Axugen的试剂盒已经很不错了，要是提不出浓度很高的质粒，可以试试下面的一些方法：
1、增加收菌次数，相对提高了质粒的量，这样的话裂解液的量可以适当增加；
2、裂解要充分，变性和复性按说明应该是不超过5分钟，合理控制时间，一般在3分到4分半的时间都是可以的；
3、过柱子时，吸附的时间尽量长一些，可以在这期间做做其他实验或者吃个饭什么的；
4、如果没有必要，不使用去蛋白液，因为每过一遍柱子，其损耗越大，不过这得根据说明的菌种而定；
4、Z后洗脱回收的时候，要单方面提高浓度，就要适当减少洗脱液的量，我一般都是回收到40~50 μL的，同时要增加洗脱次数，一般两三次足矣.
如果以上方法都用遍了还无效，就应该考虑菌种本身的问题，是不是冻融或者传代次数过高，导致质粒本身丢失?质粒本身在大肠杆菌的拷贝数是多少?不行的话建议重新将质粒导入到大肠杆菌感受态细胞中.