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质粒转化抽提后出现奇怪的杂带,请教下是怎么回事
久裁苏
2017-01-19
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sunmoon9927
如果转化成功的话,菌落里的菌就含有你克隆的质粒载体了,用枪头直接碰一下,然后作为PCR模板,就可以进行PCR扩增了。但是菌落PCR鉴定的假阳性率其实也不低,所以建议你挑取菌落扩培之后抽提质粒,进行酶切鉴定,这样比较准确,酶切鉴定确认好之后再去测序以确定没有碱基突变或缺失。
你说的T7通用引物是指载体上的T7 promtor引物吗?那只是一条引物啊,如果加上GBH下游引物的话,扩增出来的就是你连接进去的目的基因的长度了。
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2017-01-20
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