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为什么提取质粒时加入异丙醇出现了白色絮状沉淀?

hhjjxx00 2011-05-23
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潜新儿
异丙醇与蛋白质反应,使其沉淀。分析如下。

采用强碱液、加热或溶菌酶(主要针对革兰氏阳性细菌)可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和TritonX-100(一般很少使用)可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后,细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上,同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多,易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。当用强热或酸、碱处理时,细菌的线性染色体DNA变性,而共价闭合环状DNA(Covalently closed circularDNA,简称cccDNA)的两条链不会相互分开,当外界条件恢复正常时,线状染色体DNA片段难以复性,而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起,而质粒DNA双链又恢复原状,重新形成天然的超螺旋分子,并以溶解状态存在于液相中。在细菌细胞内,共价闭环质粒以超螺旋形式存在。
12 0 2016-01-16 0条评论 回复
好疼1114777111
那就是DNA沉淀。
3 0 2011-05-26 0条评论 回复
comlxq
异丙醇能使蛋白质变性,出现的絮状沉淀应为蛋白质
4 0 2012-03-07 0条评论 回复
李子易y
首先要知道,质粒是 共价,闭合,环状的DNA(cccDNA)。以常用的碱裂解法为例:当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,
15 1 2011-05-24 0条评论 回复
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