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怎样取植物样本用来验DNA

kun463016766 2017-05-30
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面瘫是班头啊
不同生物(植物、动物、微生物)的基因组DNA的提取方法有所不同;不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同,分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法,以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的YZ作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时,应考虑除去多糖和酚类物质。本实验以水稻幼苗为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。DNA一、材料水稻幼苗二、设备移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。三、试剂1、提取缓冲液?:100mmol/LTris?Cl,pH8.0,20mmol/LEDTA,500mmol/LNaCl,1.5%SDS。2、提取缓冲液?:18.6g葡萄糖,6.9g二乙基二硫代碳酸钠,6.0gPVP,240ul巯基乙醇,加水至300ml。3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇4、RnaseA母液:配方见diyi章。5、其它试剂:液氮、异丙醇、TE缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/LNaAc。四、操作步骤:(一)水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液?,60?水浴预热。2.水稻幼苗或叶子5-10g,剪碎,在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中,剧烈摇动混匀,60?水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高),不时摇动。3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液,颠倒混匀(需带手套,防止损伤皮肤),室温下静置5-10分钟,使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。4.室温下5000rpm离心5分钟。5.仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。6.在1.5mleppendorf中加入1mlTE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。7.如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟,再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60?水浴放置15分钟以上,以帮助溶解。8.将DNA溶液3000rpm离心5分钟,上清液倒入干净的5ml离心管。9.加入5μlRNaseA(10μg/μl),37?10分钟,除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响,可省略该步骤)。10.加入1/10体积的3mol/LNaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20?放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。
11 0 2017-05-31 0条评论 回复
iypoctnm
你可百度一下“植物DNA提取”,就会有很多实验方法出来了。
如:植物DNA的CTAB提取法:
1 称取新鲜叶片2-3g,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。2 将粉末转移到的加有7ml经预热的1 5×CTAB提取缓冲液15ml离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30min。3 取出离心管,冷却至室温,加入氯仿/异戊醇(24:1),充分混匀,室温下2300×g离心20min。4 将上清转移至另一新的15ml离心管中,加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀,2300×g离心20min。5 转移上清至另一新的15ml离心管中,加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000×g离心10min,使DNA沉淀于管底。6 加入1 5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。待DNA完全溶解后,加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于1 5ml离心管中,用70%乙醇清洗30min,用离心机甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。7 将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。
4 0 2017-05-31 0条评论 回复
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