细胞支原体感染 检测试剂盒 怎么检测

支原体检测试剂盒操作步骤：贴壁细胞：1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，3.吸去固定液，晾干。4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置15-20min或室温静置20～30min。5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。悬浮细胞：1.收集需检测的细胞，1500rpm，5min。2.将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。3.吸去固定液，晾干。4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置15～20min或室温静置20～30min。5.吸去Hoechst 33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。结果判断（参考）：阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。注意事项：Hoechst工作液对人体有害，请注意防护。固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。支原体检测时，Z好用不含抗生素的培养液培养2～3代，这样容易避免假阴性结果。检测支原体污染，可以使用支原体GXVero细胞，这样可以提高检测灵敏度，即将被检测样品接种于Vero细胞进行检测。