植物组织培养操作的过程

组培室标准操作程序

一 生产环境

1 工作人员进入组培室必须穿工作服，包括更换拖鞋、穿白大褂，接种人员还要带帽、带口罩。

2 所有人员在组培室内不准高声喧哗、打闹。

3 工作期间，各生产房间要关闭房门，尤其是接种间；工作人员出入要随手关门。

4 各种生产用品要安固定的位置排放整齐，不可乱拿乱放。

5 工作过程中所产生的垃圾要及时清理，尤其是接种间，其内垃圾停留时间不得超过4小时。

二 接种程序

1. 准备工作：接种人员在正式接种之前要做好准备工作，包括准备酒精灯、新洁尔灭、灭菌用脱脂棉以及准备接种工具、分取培养基、接种用苗和工作台灭菌等。

·酒精灯用工业酒精作燃料，而非75%酒精。

·工作台上用的新洁尔灭浓度是0.1%，而非0.01%。

·工作台灭菌包括两步：一是上台前用紫外灯照射30分钟，二是正式接种前再用新洁尔灭仔细擦一遍。

·培养皿的取放：从布包里取培养皿时，一定要注意，手不能接触培养皿的边沿，同时要尽可能减少与培养皿的接触面，一般规定只能用双手的拇指和食指取放。

·接种工具灭菌也分两步，一是用灭菌布包裹好，在高压锅里灭一次，这一步由灭菌人员负责完成；二是在工作台上，从布包里取出后，先用酒精擦拭一下，再放在酒精灯火焰上灼烤一遍，其要求是工具的每一点在火焰上灼烤时间不得少于5秒钟。在工具灭菌之前，工作人员的手部，包括手腕，都要用酒精仔细擦拭一遍。

2 接（转）苗：包括取苗、切苗和接苗三步。

·取苗：先解开培养瓶的瓶盖（封口膜），如果不能一次取出其内的全部材料，要先把封口膜（瓶盖）口对者风源放在酒精灯的左前方，然后把瓶口在酒精灯上烤7～10秒；正式取苗时，瓶口不要斜向外；一次取苗不可太多，以免风干。

·切苗：培养皿放在离风窗10～20厘米处，不可太往外；镊子和手术刀都不可太热，Z好是凉的，且在操作过程中，刀和镊都要培养皿斜上方操作，不可在其正上方操作；在切苗过程中产生的垃圾可堆放在培养皿内的一侧位置上，若非迫不得已，不可弄到培养皿外。

·接苗：培养瓶盖（或封口膜）的放置方法和及瓶口灼烤方法与取苗时的相同，烤完瓶口后，要先倒掉瓶内多余的水分，然后在接苗；接苗时，镊子Z好不要与瓶口接触，一瓶内一般接5～6棵苗，不要放得太多；组培苗在瓶内要排放均匀、整齐、美观。

·封口、记录：封口膜要及时捆绑，其松紧度以用手转不动为准；下台前要把品种代号、培养基类型、个人编号以及接种日期标示到瓶上。离开之前还要把工作台收拾干净，把接种过程中产生的垃圾清理掉，台上的物品也要摆放整齐。

三 组培苗的管理

1.瓶苗要整齐的摆放在自己的组培架上，不可乱放。

2.接种人员每天都要统计自己的接种数量，包括转前瓶数和转后瓶数。

3.值日人员要定时开灯、关灯，保证组培苗有足够的光照时间，但也不可过长，以每天14小时左右为宜。

四 接种用具的清洗

1.洗刷培养瓶、培养皿：diyi步：把培养瓶培养皿放入洗洁净溶液里，先用毛刷清洗内部，再用钢丝球把外面的字清洗掉。第二步：把他们再用清水冲洗3-5遍。第三步：把瓶内的积水倒掉，倒放在准备台，准备台上要先放一层纱布。这一步的清洁标准是：凉干的瓶壁（器皿）内外无明显的斑点、污迹。

2.洗涮镊子：用洗洁精浸泡五分钟，用钢丝球打磨一下然后放入清水冲洗三遍。

五 灭菌

1.对污染苗灭菌：一经发现就随即灭菌处理，大量的进行高压灭菌，少量的加入工业酒精在室外进行处理。

2.室内空气灭菌：每四周用高锰酸钾和甲醛对室内空气灭一次菌。

3.室内地面：每2－3天用新洁尔灭拖一遍地。

4.卧式和手提式高压灭菌锅使用程序：严格按使用说明书操作。