培养瓶的清洗与使用
1.浸泡:A.新的培养瓶由于在生产过程中使玻璃表面呈碱性并带有铅、砷等对细胞有毒的物质,故要先将培养瓶于5%稀盐酸溶液中浸泡过夜。浸泡时,完全浸入,瓶内无气泡空隙残留。 B.使用过后的培养瓶应立即于加有洗衣粉的自来水中浸泡,至少6h。浸泡时,完全浸入,瓶内无气泡空隙残留。(浸泡过5%稀盐酸溶液的新培养瓶,初步刷洗,浸入加有洗衣粉的自来水中,同1.B.)
2.刷洗:用软毛刷刷洗培养瓶,以去除瓶内外表面的杂质。需注意两点:一是防止损坏培养瓶内表面光洁度以影响细胞的生长,刷洗时不宜用力过猛;二是不能留有死角,要特别注意瓶角和细胞贴壁面的刷洗。刷洗后要将培养瓶冲洗干净,一般至少要冲20遍,直至瓶壁不挂水珠。放入烘箱内(四楼),烘干。(烘干是为了防止酸液被稀释。)
3.泡酸:泡酸可完全清除残留的未刷洗掉的微量杂质。将培养瓶泡酸时,要戴3层手套,注意防止酸液溅起来,灼伤皮肤,应将瓶子轻轻浸入酸液。瓶内完全充满酸液,不留气泡空隙,一般需浸泡4~6h。(由于我们的酸液颜色不是红棕色,需浸泡过夜。)注意:瓶盖不能泡浓酸,应置于5%稀盐酸溶液中浸泡,完全没入酸液中。
4.冲洗:用流水彻底冲洗。首先用自来水将瓶子灌满,再倒掉,重复20遍以上,直至不留任何残迹,瓶壁不挂水珠;然后用二蒸水洗2~3遍;Z后用三蒸水洗1遍。放入烘箱内(四楼),烘干。备用。
5.灭菌:用前1~2天,取出瓶子,拧松盖子,用牛皮纸(我们用报纸)包住瓶口,系上绳子,贴上灭菌指示胶带,作好标记。或者拧松盖子,直接放入铺有锡箔纸的铝盒内,铝盒外包上报纸,系上绳子,贴上灭菌指示胶带,作好标记(铝盒上可贴上标签纸,写上物品名称、灭菌时间、名字,便于用时寻找)。放入高压蒸汽灭菌器内(检查灭菌器内的水位是否漫过Z下层篮子的底部),121℃,30min灭菌。灭菌后,待温度降到60℃以下时,开盖取出,放入无菌烘箱内烘干。烘干后,拧紧瓶盖,取出。喷洒酒精后放入超净工作台或放入专门放置灭菌后物品的柜子里。