植物病原菌物的组织分离法的操作过程应注意哪些问题

（1）培养皿准备：取灭菌培养皿一个，置于湿纱布上，在皿盖上注明分离日期、材料和分离人姓名。
（2）培养皿平板制备：用无菌操作法向培养皿中加入25％乳酸1－2滴（减少细菌污染），然后将熔化而冷至45W左右的马铃薯琼胶培养基一管倒入培养皿中，轻轻摇动使成平面（分离细菌时则不能加乳酸）。
（3）切取病组织小块（叶斑病类）：取玉米小斑病（Bipolaris maydis）新鲜病叶，选择典型的单个病斑，用剪刀或解剖刀从病斑边缘切取小块（每边长约3一5毫米）病组织数块。
（4）表面消毒；将病组织小块放入70％酒精中浸数秒钟后，按无菌操作法将病组织移入0.1％液中消毒1－3分钟，然后放火灭菌水中连续漂洗三次。也可用漂精片（1－2片），研磨后加灭菌水10ml，消毒5－10分钟。果实、块茎和枝秆等组织内部的病原菌可用脱脂棉蘸70％酒精涂拭病部表面，通过火焰烧去表面酒精，重复进行2－3次，达到表面消毒。
（6）用无菌操作法将病组织小块移至培养基平面上，每培养皿内可放4—5块。
（6）翻转培养皿，放入26－28t恒温箱内培养，3—4日后观察结果。
（7）用无菌操作法自培养皿中选择菌落，挑取少许菌丝及孢子，在显微镜下观察。如系玉米小斑病菌抱子，即可用接种针自菌落边缘挑取小块菌落移入斜面培养基，在26－28℃恒温箱内培养，3－4天后，观察菌落生长情况，如无杂菌生长，即得玉米小斑病菌纯菌种，可置于冰箱中保存。如有杂菌生长，需再次分离获纯培养后，方可移入斜面保存。