一、实验原理
1、将培养基平板置培养箱中培养,一方面试验菌(指示菌)开始生长繁殖;另一方面抗生素呈球面扩散,形成递减的梯度浓度,离杯越近,抗生素浓度越大,离杯越远抗生素浓度越小。
2、在牛津杯周围YJ浓度范围内的细菌的生长被YZ,形成透明的YJ圈。
3、YJ圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度(药敏实验)或药物对指示细菌的YJ程度(YJ试验)。
4、抗生素浓度越高,YJ圈越大。
5、在YJ圈的边缘处,琼脂培养基中所含YJ物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的Z低YJ浓度(MIC) 。
6、YJ圈直径与药物对测试菌的Z低YJ浓度 呈负相关,即YJ圈愈大,MIC愈小。
二、实验材料
培养基:牛肉膏蛋白胨固体培养基
菌种:大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
药品:阿莫西林、黄芪多糖、
其他:牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液枪、1mL、200uL枪头、恒温培养箱、超净工作台、接种环
“牛津杯”可从东台市吉泰不锈钢制品厂采购,牛津杯是内径为6mm,外径为8mm,高10mm的圆筒形管子,管子的重量尽可能相等。
三、实验操作
1. 倒平板:将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化,倒在培养皿内,每皿约20ml,凝固。
2. 标记:菌种、牛津杯摆放位置、药物及其 浓度
3. 制备菌悬液:用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。
4. 菌液涂布:吸取1mL 菌液入平板表面,用涂布器涂布将菌液涂布均匀
5. 摆放牛津杯:在培养基表面垂直摆放牛津杯,轻轻加压,使其与培养基接触无空隙。
6.加入待检药液:在杯中加入不同稀释度的药液或待检样品。
7. 孵育:加满后在37 ℃培养16~18 h。
8. 结果报告:用毫米尺量取YJ圈直径,参考表的标准判读结果,按敏感(S)、中介(I)、耐药(R)报
以牛津杯周围没有肉眼可见生长物区域为YJ圈,根据YJ圈直径大小判断细菌对KJ药的敏感性。
YJ试验结果判定标准:YJ圈直径(毫米)