想要细胞好好贴壁,所使用的玻璃底培养皿进行细胞培养之前,要确认已经包被了特定的蛋白试剂。
自己动手包被
培养不同的细胞,需要的包被试剂也不同。同时,因为用于包被的蛋白是生物产物,所以不同公司的包被蛋白的产品纯度和用量都是不同的,本技术帖只是提供参考,具体的包被试剂用量还是要参考所用品牌的说明书。并且Z好以自己所用的试剂先做一个梯度实验,找出Z适合的包被浓度。
这里以 Poly-L-Lysine 为例:
PLL包被适用于绝大多数细胞,尤其适用于系统神经元的培养。在使用时需要使单位面积上的蛋白含量(μg/cm2)达到理想的量。本例中PLL推荐包被的用量为 2μg/cm2。需要根据包被面积,包被体积,来计算所需要蛋白质的量。
比如:35mm玻璃底培养皿,细胞生长面积是3.5cm2,包被面积是4.1cm2,包被液体积是400μl,那根据推荐用量2μg/cm2。那么单孔中需要8.2μg的PLL,如果只加入400μl的PLL溶液,那PLL的溶液浓度为20.5μg/ml(约为 20μg/ml)。所以,需要用超纯水将原液进行稀释。
具体步骤:
1.使用超纯水按照1:5稀释PLL原液。
2.在每个35mm玻璃底培养皿中加入400μl的PLL稀释液。
3.室温孵育1-2小时,吸出PLL稀释液。
4.使用2ml PBS溶液或无血清培养基小心的清洗3次,吸尽清洗液。
5.直接加入细胞悬液进行培养。