仪器网(yiqi.com)欢迎您!

| 注册登录
网站首页-资讯-专题- 微头条-话题-产品- 品牌库-搜索-供应商- 展会-招标-采购- 社区-知识-技术-资料库-方案-产品库- 视频

问答社区

除了传统的细菌培养方法,还有哪些可以快速检验菌落总数

286338774 2017-06-16 04:55:10 436  浏览
  •  

参与评论

全部评论(1条)

  • 李李刘硕 2017-06-17 00:00:00
    一、菌落总数介绍: 菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度,与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。 菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定,即在需氧情况下,37℃培养48h,能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数,所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌,由于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。 菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量,它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。 二、检验方法 菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数,计算出每克(或每ml)原始样品中所含细菌菌落总数。 基本操作一般包括:样品的稀释--倾注平皿--培养48小时--计数报告。 国内外菌落总数测定方法基本一致,从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同,只是在某些具体要求方面稍有差别,如有的国家在样品稀释和倾注培养进,对吸管内液体的流速,稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。 检验方法参见: GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》 SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》 三、说明 (一)样品的处理和稀释: 1.操作方法:以无菌操作取检样25g(或25ml),放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振要或研磨制成1:10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后,Z好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min,制成1:10的均匀稀释液。 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混合均匀,制成1:100的稀释液。 另取1ml灭菌吸管,按上项操作顺序,制10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。 2.无菌操作:操作中必须有“无菌操作”的概念,所用玻璃器皿必须是完全灭菌的,不得残留有细菌或YJ物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装,应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。 操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟,每个平板不得超过15个菌落。 3.采样的代表性:如系固体样品,取样时不应集中一点,宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨,液体样品须经过振摇,以获得均匀稀释液。 4.样品稀释误差:为减少样品稀释误差,在连续递次稀释时,每一稀释液应充分振摇,使其均匀,同时每一稀释度应更换一支吸管。 在进行连续稀释时,应将吸管内液体沿管壁流入,勿使吸管伸入稀释液内,以免吸管外部粘附的检液溶于其内。 为减少稀释误差,SN标准采用取10mL稀释液,注入90mL缓冲液中。 5.稀释液:样品稀释液主要是灭菌生理盐水,有的采用磷酸盐缓冲液(或0.1%蛋白胨水),后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品(如酱油)进行稀释,可以采用灭菌蒸馏水。 (二)倾注培养 1.操作方法:根据标准要求或对污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别在制10倍递增稀释的同时,以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做两个平皿。 将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml,并转动平皿,混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。 待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h,取出计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得每克(每毫升)样品所含菌落总数。 2.倾注用培养基应在46℃水浴内保温,温度过高会影响细菌生长,过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴,应以皮肤感受较热而不烫为宜。 倾注培养基的量规定不一,从12~20ml不等,一般以15ml较为适宜,平板过厚可影响观察,太薄又易于干裂。倾注时,培基底部如有沉淀物,应

    赞(20)

    回复(0)

    评论

获取验证码
我已经阅读并接受《仪器网服务协议》

热门问答

除了传统的细菌培养方法,还有哪些可以快速检验菌落总数
 
2017-06-16 04:55:10 436 1
肉制品微生物检验和理化检验,还有菌落总数和大肠杆菌结果咋看
 
2012-07-17 01:15:51 506 2
菌落总数的计算?
食品的样品稀释度分别是1;10和1;100 结果是200和300 ! 问平板菌落数应该是多少?如何算? 比如我的1;10稀释度菌落数是156.96?应该结果是多少 cfu/ml 在比如1;100稀释度菌落数是34.42 ? 应该结果是多少 cfu/ml 谢谢各位。
2010-05-18 10:38:49 768 3
菌落总数大肠杆菌和致病菌的检测方法
菌落总数,大肠杆菌,和致病菌的检测方法。 我对微生物一点基础都没有,希望有朋友能详细的回答我,有重谢
2008-09-04 06:38:42 531 4
细菌培养的方法有哪些
 
2017-12-10 15:36:36 1039 1
细菌培养的方法有哪些?
 
2012-01-20 10:02:43 696 1
如何检验一次性餐具菌落总数和大肠杆菌啊?
 
2010-07-05 04:06:44 508 2
GB/T 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验.菌落总数测定
新手上路,这个实验完全不会做,现在必须学会这个实验,有哪位好心的朋友可以告诉我这个检验方法要提前准备购买哪些试剂?做哪些准备?详细的操作步骤(通俗易懂一点的),太书面不理解.设备有... 新手上路,这个实验完全不会做,现在必须学会这个实验, 有哪位好心的朋友可以告诉我这个检验方法要提前准备购买哪些试剂?做哪些准备? 详细的操作步骤(通俗易懂一点的),太书面不理解.设备有现成的.....大侠帮帮忙!!! 展开
2011-07-28 01:46:19 398 1
平板菌落计数法的菌落总数介绍
 
2018-11-29 15:43:45 278 0
谁知道快速鉴定微量微生物的三种方法除了API还有哪些吗?谢谢啦
 
2010-12-13 10:42:48 445 1
除了离子色谱法外,测定阴离子的方法还有哪些
 
2017-10-22 11:24:55 288 2
除了离子色谱外,测定阴离子的方法还有哪些
 
2017-09-30 01:26:20 453 2
管道除了快速连接头,还有什么接头
 
2018-11-13 21:23:02 418 0
酶底物法快速检测水中菌落总数结果准确性考究

  菌落总数(Totalcoliforms)是判定水质被细菌污染程度的重要指标之一,其测定方法也有一定的标准。平皿计数法是早期传统的水中菌落总数标准检测方法,其应用研究也比较多,如钱冬梅应用平皿计数法测定了生活饮用水中的菌落总数。这种方法实验步骤较为繁琐,对操作人员的专业水平要求比较高,不适用于应急快速检测,无法对水的卫生状况做出快速评价。

  酶底物法是近些年来新兴的水中菌落总数检测方法,操作简便,结果易判断,适用于快速检测。但不少用户对此种方法存疑,不知道这种方法出来的检测结果是否科学准确,下面优尔普就以平皿计数法的检测结果为准,用酶底物法程控定量封口机进行实验检测对比。

立科酶底物法程控定量封口机

酶底物法快速检测水中菌落总数实验

一、实验操作部分

1、实验原理

  酶底物法使用的复合酶技术培养基包含多种独特的酶物质,每种酶物质都针对不同的细菌酶设计(包含普遍的水介传播细菌),所有的酶底物被分解时均产生相同的信号。在检测菌落总数时,这个信号显示为365纳米紫外4O城镇供水NO.22013灯下的荧光。

2、材料与试剂

  立科定量盘、lmL移液管或移液枪、10mL移液管或移液枪、培养箱(35±1)、6瓦366FIITI紫外灯、紫外灯箱(23cmx30onx17on1)、无菌水。

3、方法步骤

酶底物法检测方法操作步骤

(1)首先向100mL装有固体培养基的瓶中加入无菌水至刻度,摇匀,制成液体培养基,然后放置在冰箱中保存,使用有效期为5天。见图1。

(2)取1mL水样及9mL液体培养基倒入立科定量盘中。见图2。

(3)将定量盘盖好,在水平桌面上旋动将所有水样分配到定量盘的孔中(孔中的气泡不会影响结果)。见图3。

(4)将定量盘竖起呈垂直90度,将多余的水样由盘内海绵吸收。见图4。

(5)将定量盘缓慢翻转过来,于培养箱中(35±0.5)培养48h(若结果为可疑阳性则延长培养时间至72h)。见图5。

(6)计数:培养完成后将培养盘盖打开,用紫外灯在定量盘上方13on处照射,数显荧光的孔数。对照MPN表得出结果。注意:海绵条显荧光不必记录在读数范围内。由于本方法的Zda检测上限为738MPN/mL,如需稀释时,将结果乘以稀释倍数即为报告读数(如稀释l0倍时的操作为:加入0.1mL样品和9.9mL液体培养基)。

二、结果与分析

1、盲样比对实验--T检验分析

  选取三个水质检测实验室对比同一盲样(标准试剂)进行酶底物法和平皿计数法比对试验,具体试验结果如图。

EPA标准盲样检测结果

  对比以上酶底物法和平皿计数法检出共160个结果进行配对T检验,两种方法的配对T检验结果如下表。

配对检验结果

  标配比变量差值的T检验结果,Mean均值之间的差值为-1.78750,Std.Deviation差值的标准差16.10385,Std.ErrorMean差值的调准误为1.80047,95%ConfidenceIntervaloftheDifference置信区间上下限为-5.37124和1.79624,t-valuet值为-0.993,df自由度为79,Sig(2-tailed)双尾T检验的结果,获得t值的概率P值为0.324,检验结果表明酶底物法和平皿计数法检测结果没有统计学意义上的差别(P<0.50)。

2、水样检测--线性回归分析

  采集地表水水样进行检测,为保证实验结果的有效性和方便统计,要求检测高、低浓度两个水样,同时,要求低浓度水样的MPN值控制在50MPN/ml左右,高浓度水样的MPN值控制在100MPN/ml左右,分别从国内9个地区采集水样,试验结果如图。

实验室水样检测结果

  对以上9家实验室用酶底物法和平皿计数法共1160个检测结果进行线性回归统计分析,两种方法线性回归分析见下表。

检测结果线性回归统计分析

  从图表中可知,标准化回归系数Beta为0.95,表明两组数据相关性较好,两种方法的检测结果具有可比性。检验结果P=0.00,均小于0.05,表明两种方法在检测菌落总数时没有显著差异性,具有等效性。此结果说明酶底物法的测定结果准确、可靠,可以替代平皿技术发作为水中菌落总数的测定方法。

  从上述实验可以看出,酶底物法快速检测水中菌落总数的检测结果与平皿计数法无统计学意义上的差别,是科学的、有效的、准确的,可以用作评价水质微生物污染的标准依据。酶底物法操作简单,结果判读容易、准确,无需稀释即可检测738个/1mL水样,不仅适用于水源水、饮用水的检测,还适用于应急检测和污水检测,易于推广,可以较好的弥补传统方法的不足。

2020-07-11 11:28:18 867 0
影响菌落总数准确性的因素有哪些
 
2015-04-07 16:42:27 821 1
关于菌落总数测定
关于菌落总数测定Z新国家标准中,菌落总数的计算方法计算菌落总数 公式:N=∑C/(n1+0.1n2)d 式中: N——样品中菌落数 ∑C——平板中菌落数之和 n1——diyi个适宜稀释度平板上的菌落数 n2——第二个适宜稀释度平板上的菌落数 d——稀释因子(diyi... 关于菌落总数测定Z新国家标准中,菌落总数的计算方法计算菌落总数 公式:N=∑C/(n1+0.1n2)d 式中: N——样品中菌落数 ∑C——平板中菌落数之和 n1——diyi个适宜稀释度平板上的菌落数 n2——第二个适宜稀释度平板上的菌落数 d——稀释因子(diyi稀释度) 请教下D稀释因子是什么意思啊 展开
2010-03-05 04:03:17 541 3
菌落总数怎样计算
 
2015-10-29 04:57:49 1442 2
自来水菌落总数检测
哪位大师告诉一下自来水菌落总数检测的步骤,正规的做法有没有稀释?还是直接检测直接报告?
2017-11-25 06:28:23 420 1
菌落总数的结果怎么看
 
2010-08-13 14:09:48 576 1
除了日晷、沙漏、书钟,还有哪些计时的方法?
 
2013-06-29 09:53:14 634 3

2月突出贡献榜

推荐主页

最新话题