酶的不可逆YZ是指酶YZ剂与酶的活性ZX发生了化学反应YZ剂共价地连接在酶分子的必需基团上,阻碍了底物的结合或破坏了酶的催化基团。这种YZ不能用透析或稀释的方法使酶恢复活性。
通常将其分为非专一性不可逆YZ剂和专一性不可逆YZ剂。
YZ剂与酶分子上不同类型的基团都能发生化学修饰反应,这类YZ称为非专一性的不可逆YZ。虽然缺乏基团专一性,但在一定条件下,也有助于鉴别酶分子上的必需基团。由于非专一性的不可逆YZ剂通常可作用于酶分子中的几类基团。但不同基团与YZ剂的反应性不同,故某一类基团常首先或主要地受到修饰。如被修饰的基团中包括必需基团,则可导致酶的不可逆YZ。随着蛋白质一级结构和功能的研究,目前已发现或合成了氨基酸侧链基团的修饰剂。这些化学试剂主要作用于某类特定的侧链基团,如氨基、巯基、胍基和酚基等。但绝大多数试剂都不是专一性的,可借副反应而同时修饰其他类型的基团。
专一性的不可逆YZ作用有KS型和Kcat型两类。KS型不可逆YZ又称亲和标记试剂,结构与底物类似,但同时携带一个活泼的化学基团,对酶分子必需基团的某个侧链进行共价修饰,从而YZ活性。Kcat型不可逆YZ剂又称酶的自杀性底物。这类YZ剂也是底物的类似物,但其结构中潜在着一种活性基团,在酶的作用下,潜在的化学活性基团被激活,与酶的活性ZX发生共价结合,不能再分解,酶因此失活。
KS型不可逆YZ剂是根据底物的化学结构设计的:
1、它具有和底物类似的结构,
2、可以和靶酶结合,
3、同时还带有一个活泼的化学基团可以和靶酶分子中的必需基团起反应,
4、该活泼化学基团能对靶酶的必需基团进行化学修饰,从而YZ酶的活性。
卤酮是使用Z早也是Z经典的亲和标记试剂。其中以溴酮及氯酮较佳。例:胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶是两种专一性不同的内肽酶,分别水解碱性氨基酸或芳香氨基酸的 羧基所形成的肽键,也可以分别水解这两类氨基酸的酯类,但其氨基酸必须被阻断而成非游离状态。
Kcat型不可逆YZ剂即酶的自杀性底物,也是底物的类似物,但其结构中潜在着一种活性基团,在酶的作用下被激活,与酶的活性ZX发生共价结合,使酶失活。每一种自杀底物都是酶的作用对象,这是一种专一性很高的不可逆YZ剂