用水溶液提取蛋白酶时防止蛋白酶失活的方法有哪些

蛋白酶YZ剂
破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被YZ以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶YZ剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶YZ剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶YZ剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶YZ剂时应充分混匀以减少蛋白酶YZ剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶YZ剂表。

常用YZ剂
PMSF
1)YZ丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);
2)10mg/ml溶于异丙醇中;
3)在室温下可保存一年;
4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);
5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。
EDTA
1)YZ金属蛋白水解酶;
2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;
3)溶液在4℃稳定六个月以上;
4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);
5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。