仪器网(yiqi.com)欢迎您!

| 注册登录
网站首页-资讯-专题- 微头条-话题-产品- 品牌库-搜索-供应商- 展会-招标-采购- 社区-知识-技术-资料库-方案-产品库- 视频

问答社区

western blot为什么用三层滤纸

245489246 2017-09-03 14:57:14 441  浏览
  •  

参与评论

全部评论(1条)

  • 飓风级潜艇 2017-09-04 00:00:00
    Z外面两层滤纸~里面是胶和膜~为了夹得更紧密可适当增加外层的滤纸数~

    赞(2)

    回复(0)

    评论

获取验证码
我已经阅读并接受《仪器网服务协议》

热门问答

western blot为什么用三层滤纸
 
2017-09-03 14:57:14 441 1
western blot是什么意思
 
2016-11-30 20:01:24 825 1
Western免疫印迹(Western Blot)的原理是什么?
 
2013-11-19 19:23:05 581 1
western blot 的工作原理
western blot 的工作原理,要详细点的,谢了
2012-07-02 07:07:12 452 3
western blot可以测哪些翻译后修饰
 
2017-07-22 20:47:38 519 1
蛋白质印迹为什么叫western blot
和方位有什么关系吗?还是历史原因?
2015-12-29 14:20:14 594 1
ProteinSimple发布单细胞western blot系统

细胞异质性是肿瘤研究,干细胞研究,免疫学研究的极其重要的研究方向。单细胞研究是


分析细胞异质性的主要手段。单细胞组学研究也是jing准医学首要的研究领域。

美国ProteinSimple公司首推基于芯片Western Blot技术,进行单个细胞蛋白质表达水平定


量分析系统: Milo.

Milo具有极其强大的功能:

1. 单张芯片进行1000个单细胞western blot

2. 每个单细胞可进行数十个靶蛋白检测

3. 仅需使用Western blot验证抗体,具有抗体通用性

4. 基于western blot技术,蛋白进行分离后检测,提高免疫学检测特异性

5. 全程检测只需4小时

2019-12-31 17:21:27 296 0
Western Blot归一化讲座精彩内容提炼

期刊对Western Blot数据要求:

1. 内参和目的蛋白在同一张印迹膜上;

2. zuihao选择膜染色进行总蛋白归一化;

3. 如果使用看家蛋白,需要提供看家蛋白表达稳定并且不受实验条件影响的证据;

4. 成像方法的线性范围需要提供。

看家蛋白一般常用于内参质控,整张膜上的weiyi质控标准,但是看家蛋白一般表达量比较高,可能与目的蛋白不在一个线性范围内,影响定量;并且看家蛋白证明在多种实验条件下是会发生变化,例如:细胞融合,疾病和药物ZL等等,影响定量jingzhun性。

总蛋白质控直接在膜上检测总蛋白,变异性小,误差小,动态范围更宽,使用整个泳道或泳道中大部分信号用于归一化,而不是单一的条带,例如JBC、Nature和Proteomics等期刊推荐使用总蛋白进行归一化。

Azure可提供一站式Western Blot归一化解决方案。

提供两种总蛋白染色试剂Azure Red和TotalStainQ进行膜染色和总蛋白归一化,AzureRed适合低丰度表达样品,TotalStain更适合细胞裂解液样品。

Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统和Azure Imager多功能分子成像系统可进行总蛋白归一化,成像更简单,归一化更方便。

Azure成像系统除了可进行Western Blot成像外,功能非常强大,可进行凝胶、In cell Western孔板成像、2D和2D-DIGE、微阵列芯片、切片、动植物组织、小鼠成像、放射性同位素磷屏成像等。

2020-08-18 14:21:44 399 0
western blot安装电泳槽,蛋白面对哪里
 
2016-10-26 00:12:19 472 1
Western Blot 化学发光为什么出现高背景
 
2017-09-07 22:09:24 378 1
蛋白免疫印迹杂交(Western Blot)设备多少钱
 
2013-01-15 19:16:34 420 1
western blot转膜不用甲醇可以吗
 
2017-04-14 01:48:08 550 1
western blot和流式细胞术哪个更好
 
2016-06-13 04:02:05 528 1
Western Blot归一化:看家蛋白or总蛋白

做Western Blot的小伙伴,是不是还在为归一化方法而纠结呢?今天小编就和大家汇总一下看家蛋白和总蛋白归一化的方法。

看家蛋白归一化

使用看家蛋白的缺点是在样品间和不同条件下表达水平可能不一致。如使用看家蛋白进行标准化,必须先花费时间和精力来验证内参的选择。

使用看家蛋白的第二个重大挑战是它们的表达丰度很高,如果样品中的看家蛋白表达非常高,这会限制在凝胶上加载的样品量,如果感兴趣的蛋白不是同样的表达丰度,那这两种蛋白质就不在同一线性检测范围内。

如果您正在进行多重蛋白印迹,例如比较同一蛋白质的磷酸化和非磷酸化形式,则需要考虑的第三个挑战是从不同物种中产生一抗和二抗的复杂性。

检测的看家蛋白可能干扰感兴趣蛋白的检测。理想情况下,看家蛋白应该与感兴趣蛋白的大小不同,因此这两种蛋白可在印迹上空间分辨。当实验在同一印迹上检查多种目的蛋白时,这就变得越来越困难。


总蛋白归一化


使用总蛋白归一化,是直接在膜上检测总蛋白,并且该值在归一化时用作分母。总蛋白染色提供更宽的动态范围,并且表现出比看家蛋白更低的可变性和更准确的定量数据。

与使用看家蛋白相比,图像采集后的分析工作流程基本不变; 整个泳道或泳道中大部分信号用于归一化,而不是单一的条带。

例如:JBC、Narute和Proteomics等期刊会推荐使用总蛋白归一化方法。

使用总蛋白染色剂对膜进行染色提供了质控优势,可以验证转印是否完全。


Azure提供全套的总蛋白归一化解决方案。咨询请拨打:电话:010-57256059



2020-07-10 16:51:22 480 0
Western blot化学发光(ECL)时,出现非特异条带

Western blot化学发光(ECL)时,出现非特异条带,应该怎么办?


2018-04-04 17:31:32 265 1
Western Blot 化学发光(ECL)为什么会“淬灭”?
 
2015-08-27 14:03:41 581 1
western blot的枪头需要高压吗
 
2016-08-21 20:08:57 476 1
做一个western blot多少钱?如何做好蛋白免疫印迹
 
2017-02-15 12:36:23 668 1
定量Western Blot 一定要有内参质控(上)

定量western blot 一定要有内参质控(上)

Western Blot是生物修炼的一大实验,现在不做定量Western Blot,都不敢自诩学霸的了,暗暗擦汗的有没有?

在讨论如何从Western Blot中获得定量数据之前,先定义一下我们所说的“定量”是什么意思是非常有用的,何为定量,必须符合下列准则:

♦ 使用一个定义的过程进行检测,即Western Blot。

♦ 这个过程产生一个可重复的结果,即是精确度。

♦ 测量反映了一个“真实”的结果,即是准确度。



定量Western Blot除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外,是一定要检测内参的,也就是内部参照(Internal Control),目的是校正蛋白质转印和上样过程中导致的实验误差,保证实验结果的准确性。对于哺乳动物细胞表达来说,内参通常指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用其作为参照物。

在发表文章时,Western Blot实验结果需内参进行校正,但仍有一些科研人员在实验中忽略内参的使用,将蛋白浓度测定作为规范是比较各种样品间上样量等同的唯yi方法。然而各种蛋白质浓度定量方法,都存在局限性,例如BCA方法对还原性试剂兼容性差,Bradford方法对去垢剂兼容性差,A280方法影响因素比较多,不能完全准确的确定各种样品的蛋白浓度。在Western Blot实验时使用内参,即可简便地对转印和上样步骤产生的误差进行校正。

谁能看出这是“GAPDH”


那么如何实现Western Blot实验中内参的检测呢?简单讲就是在WB过程中,除加入靶标蛋白的抗体外,也加入内参蛋白的抗体,同时实现靶标蛋白和内参蛋白的检测。通过归一化,可以校正上样误差和转印误差,从而获得比较准确的Western Blot结果。

使用荧光方法进行定量Western Blot检测,可进行多重检测,荧光信号稳定,持久,影响因素少,不用剥离膜和剪膜,实验条件一致,更容易获得定量Western Blot的数据。Azure600可以同时进行4通道荧光成像,无需剥离和重孵育,靶标蛋白和内参蛋白同时在一张印迹膜上成像,更容易被期刊杂志接收。

如果蛋白表达是高丰度的,可见荧光方法也可以尝试,如果是3色RGB可见荧光,能够同时检测两种靶标蛋白和一个内参蛋白。

小编列出了常见蛋白质内参,供参考哈:

想了解更多关于内参选择的小伙伴敬请期待下期精彩内容。


2020-04-17 09:58:28 332 0

2月突出贡献榜

推荐主页

最新话题