微生物细菌总数鉴定时出现红色菌落是什么情况

细菌菌落总数是微生态制剂样品检测必做的一项指标。菌落总数检测同其他检验一样，也存在检测误差。平板计数法是检测饲料中细菌总数、活酵母数、芽孢杆菌数及乳酸菌数的常用方法之一，因此，该值准确与否直接关系到微生物饲料添加剂类产品的质量好坏。微生物平板计数的通常方法为每个样品用 3个稀释度，每个稀释度常做 3个重复。但如何对平板菌落进行正确计数、3个稀释度以哪一个稀释度进行计数及微生物检测允许误差等问题，在饲料标准中并未有所规定，而这些问题与统计值的准确性密切相关。我们就实际检测芽孢杆菌工作中遇到一些菌落计数的问题，与大家进行探讨。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1样品：随机抽取微生态饲料添加剂合生素样品3份。

1.1.2培养基：营养琼脂。

1.1.3仪器设备：磁力搅拌器，无菌培养皿，培养箱，振荡器。

1.2 试验方法

1.2.1样品的振荡时间对菌数检测的影响

选择1个样品，称取10 g，放入无菌锥形瓶内，加入90 mL无离子水，磁力搅拌分别为l0、20、30、40和60 min。

用1 mL移液枪从中吸取1 mL样品悬浊液加入到盛有9 mL去离子水的试管中，用振荡器使样品充分均匀，以此类推，制成10-1～1O-7不同稀释度的样品溶液。

平板涂布法检测菌含量：用移液枪从样品稀释液中各吸取200uL，每个样品稀释液3个重复；将平板倒置于35-37℃培养箱中培养24 h。

1.2.2检测方法对菌数检测的影响

各个样品称取l0 g，放入无菌锥形瓶内，加入90 mL无离子水，磁力搅拌分别为40 min。并稀释成10-1～l0-7不同稀释度的样品溶液。

倾注平板法检测菌含量：用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取1 mL，每个样品稀释液3个重复，待培养基表面干燥后，将平板倒置于35-37℃培养箱中培养24 h。

平板涂布法检测菌含量：用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取200uL涂布平板，每个样品稀释液3个重复；将平板倒置于35～37℃培养箱中培养24 h。

2结果

2.1样品的振荡时间对菌数检测结果的影响

采用细菌平板计数的方法，不同振荡时间对合生素中芽孢杆菌检出量的结果见表1。从表l中可见：不同振荡时间获得的细菌菌落数量有较大差别。总体而言，在一定时间内，随着振荡时间的延长检出有效菌含量增加，说明细菌从载体上解析需要一定的时间；当振荡时间为40 min后产品中的菌含量基本稳定。采用适当振荡时间才能更精确的显示产品中有效菌的含量。

表1 震荡时间对有效菌含量结果的影响 亿CFU／g

震荡时间
10min
20min
30min
40min
60min
含菌量
2
6
10.5
15
14
2.2 检测方法对菌数检测结果的影响

表2 检测方法对有效菌含量结果的影响 亿CFU／g

检测方法
样品平行
1
2
3
倾注平板法检测有效菌含量
16.1
13.0
15.3
平板涂布法检测有效菌含量
14.5
11.2
14.2
采用不同的检测方法，对合生素中芽孢杆菌检出量的结果见表2。从表2可见：不同方法获得的细菌菌落数量有差别，倾注平板法相较平板涂布法检测的菌含量多，但基本在20％误差范围内。平板计数法操作相对简单、快捷且影响因素较少。倾注法培养基营养分布较均匀，对部分蔓延菌落能控制，但对操作人员熟练程度要求相对较高。

3分析与讨论

3.1样品处理对结果的影响

取样时对样品取样口和取样工具要消毒，防止样品交叉污染。

3.2样品的均质处理对结果的影响

固体样品要用均质器或玻璃珠等充分均质，也可在稀释液中添加相应溶解液（如吐温80和液体石蜡等）的稀释液，以保证样品的充分均质。

测定芽孢杆菌活菌数时，不同振荡时间获得的细菌菌落数量有较大差别，因为细菌从载体上解析并均匀分散到溶液中需要一定的时间，待测样品应在振荡器上充分振荡，使得芽孢杆菌可以充分和均匀地分散到待测溶液中，避免因为菌体未完全释放而引起结果中细菌含量偏低的现象。

3.3 试验过程中操作方法的影响

加样l mL时，用1 mL的吸管并且每做一个稀释度都要换1支吸管，否则稀释度间菌落计数误差会超过10％，说明存在操作误差。用吸管向平皿里加样，平皿开口要小，吸管要直立且加样结束后，让吸头接触皿底干燥处，保证加样的体积不少。