待琼脂凝固后，为什么还要在加3ml4ml vrba覆盖平板表层

食品微物检验 肠菌群计数：肠菌群平板计数（GB 4789.3-2011）
试剂仪器
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB肉汤）
结晶紫性红胆盐琼脂（VRBA）
恒温培养箱
自稀释仪
均质器
振荡器
二 品处理
固体品应菌条件充粉碎本演示乳粉例取密封状态良试备用待测
三 检测程
实验前准备
进入菌操作室前应更换菌实验服戴帽、口罩、菌手套进入菌操作室首先用镊夹取适量酒精棉全面擦拭双手才能进行实验操作
酒精易燃擦拭双手程应离酒精灯火焰定距离防止现危险待手酒精挥发完全再进行实验操作
品稀释
取洁净菌均质袋于自稀释仪用酒精棉充擦拭品袋剪刀置于酒精灯外焰充灼烧剪品袋称勺于酒精灯外焰灼烧片刻准确称取25g品于菌均质袋用酒精灯外焰灼烧注水口片刻盛品均质袋注入225mL菌理盐水或磷酸盐缓冲液取均质袋均质袋放入拍击式均质器用均质器拍打1min～2min制1:10品匀液
注意：品匀液pH值应6.5～7.5间必要用1 mol/L菌氢氧化钠或1mol/L菌盐酸溶液调节
均质完毕做标记均质袋置于品框
装9mL理盐水菌试管做标记用1mL菌吸管吸取1:10品匀液1mL沿管壁缓缓注入装9mL理盐水菌试管稀释前试管口都应酒精灯灼烧片刻加塞于振荡器混合均匀制1:100品匀液同理按述操作依制十倍递增系列稀释品匀液稀释品注意吸管或吸触及稀释液面；每递增稀释1换用1支1mL菌吸管或吸
接种及培养
事先经灭菌处理培养皿底部做标记根据品污染状况估计选取2～3适宜连续稀释度本演示做1:101:100品稀释液
用菌吸管吸取1:10品稀释液1mL加入培养皿备用同理加入1:100稀释液空白液注意每稀释度应接种2菌培养皿空白液即1mL理盐水代替1mL品稀释液
加完品梯度稀释液即倾倒培养基倾倒前应锥形瓶瓶口酒精灯充灼烧灼烧及倾注15mL～20mL结晶紫性红胆盐琼脂于每培养皿旋转培养皿培养基与液充混匀倾注培养基应锥形瓶口尽量伸入培养皿内防止倾倒培养基挂培养皿内壁或外壁且倾倒程应断防止培养基沿锥形瓶外壁流、滴落培养基温度46℃宜能高或低温度高利于操作且菌体害温度低培养基迅速凝固菌体能培养皿内均匀布导致菌落计数困难转培养基用力须均匀防止培养基沾培养皿盖或洒
倒完培养基静置培养皿等待培养基冷却凝固
待培养基凝固再加3mL～4mL 结晶紫性红胆盐琼脂覆盖平板表层加两培养基主要目：使菌体均培养基内部便于观察典型菌落形态等待培养基冷却凝固待培养基凝固翻转平板置于培养箱于36℃±1℃条件培养18h～24h
平板菌落计数
选取菌落数15CFU～150CFU间平板别计数平板现典型疑肠菌群菌落其典型菌落特征紫红色菌落周围红色胆盐沉淀环菌落直径0.5mm或更
证实实验
先煌绿乳糖胆盐肉汤管做标注接种环置于红外灭菌器灭菌再用接种环结晶紫性红胆盐琼脂平板挑取10同类型典型疑菌落别移种于煌绿乳糖胆盐肉汤管内振摇均匀每接种都应及接种环灭菌器灭菌接种完煌绿乳糖胆盐肉汤管置于培养箱于36℃±1℃条件培养24h～48h培养完毕观察煌绿乳糖胆盐肉汤管产气情况凡管内倒管气泡者即报告肠菌群阳性