为什么Western Blot化学发光(ECL)会出现高背景？

A：Western Blot导致“背景高”的原因有很多，主要有以下几个方面：

①. 抗体浓度过高，洗涤不充分，
②. 封闭不充分，会造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。
③. 使用了不恰当的封闭剂，可尝试不同的封闭剂。
④. 曝光过度，可减少底物显色时间，缩短曝光时间。
⑤. 操作过程中膜干了。确保膜完全浸没于buffer中，始终杜绝膜干。
所以选择好的抗体和发光试剂盒非常关键，抗体技术目前国内还不成熟，建议选择进口试剂，不然容易特异性不好，发光试剂盒技术已经很成熟了，目前国内国外很多公司都研发出了灵敏度很高的试剂盒，进口可以看一下pierce的，但价格较贵，国产可以看一下上海炎熙生物的极敏型ECL试剂盒。和pierce一样是fg级别。很稳定。