分光光度法中,样品中被测组分浓度过大或浓度过小(吸光度过高或过低)时,测量误差均较大。为克服这种缺点而改用浓度比样品稍低或稍高的标准溶液代替空白试剂来调节仪器的透光率(对浓溶液)或0%透光率(对稀溶液)以提高分光光度法精密度、准确度和灵敏度的方法,称为差示分光光度法。差示分光光度法又可分高吸光度差示法,低吸光度差示法,精密差示分光光度法等。
示差法和一般的光度法不同之处在于,示差法不是以空白溶液(不含待测组分的溶液)作为参比溶液,而是采用比待测溶液浓度稍低的标准溶液作为参比溶液,然后测量待测溶液的吸光度,从而测出待测液的浓度,从而大大提高测定结果的准确度。
A=A1-A2
=(Ax+Az)-(Ay+Az)
=Ax-Ay
=(Ex-Ey)CL