蛋白定量 bca 需要裂解细胞吗

本品是一种传统的细胞组织快速裂解液.使用本品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等.主要成分为50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.1% SDS. 使用本品裂解得到的蛋白样品，可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度.由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度. 保存条件：4℃ 制备细胞裂解产物： 1、800g 4℃离心5 分钟，收集细胞，估计细胞离心后的体积(PCV，106 cells ≈ 20ul PCV， 107 cells ≈ 100 ul PCV) 2、每50~100ul PCV 加入5 倍体积的蛋白裂解液（250~500ul），冰浴中放置10 分钟，且每隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒； 3、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物； 4、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物. 制备组织裂解产物： 1、取50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS 洗涤2 次，离心弃去PBS； 2、加入0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液； 3、4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40 次，直到95%的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10 分钟，且每隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒； 4、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物； 5、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物. 6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃.