血涂片染色检查原虫的方法和步骤

方法和步骤如下：
一、玻片清洁
玻片清洁。清洁的玻片无油脂，无划痕，无灰尘，玻片
上有油迹，使厚血膜容易脱落，薄血膜涂布不均匀。在用手
指持玻片时，只能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表
面以避免手指上的油污染污玻片。
1.新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水冲洗，然后
用软而洁净的毛巾擦干待用。
2.使用过的载玻片的清洁方法有两种：
①5%的肥皂水煮沸法
将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥皂 水，煮沸
后将玻片一张一张地平放进肥皂水内，微火煮约一刻钟，然
后灭火待肥皂水稍冷后，用清洁干毛巾擦净后待用。
②清洁液浸泡法清洁液配制如下
重铬酸钾 80g
浓硫酸 100ml
水(清净水)1000ml
配制时须先将重铬酸钾研细放入水中，慢慢加温到全部
溶解为止，然后缓缓加入浓硫酸，待溶液冷却后倒入有盖的
大口玻璃缸内。清洁玻片时，将待洗的玻片逐张放入清洁中
浸泡一两天后，取出清水冲洗至完全没有黄色为止。浸泡前
Z好用二甲笨除去镜油，清洁液颜色变为墨绿色后即失去清
洁作用，不能再用。
二、制片
1.薄血膜涂制
(1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采血针
迅速刺入耳垂近下端边缘处。
(2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方向
将耳垂轻轻挤压出血。
(3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触耳垂
上的血滴不要将玻片接触耳垂上的皮肤，使一小滴血在
玻片上。血量1-1.5mm
3
.1/4.火柴头大小。
(4)将推片臵于血溶之前与血液相接触，待血液沿推片边
缘展开后，将推片与载玻片保持30角度，用力均匀迅速将
推片由右向左推出而制成薄血膜。涂制得较好的薄血膜只有
一层血球，血球的分布排列比较均匀，血膜的末端突出如舌
状。
若取的血滴太大，则涂制的血膜太宽太厚，若推时用力
不均匀，则易成梯田状
若用力太大，则血膜两端过厚，若涂片上有油污，则血
膜成多孔状。
2.厚血膜涂制，薄血膜涂好后，再轻挤耳垂挤出约火柴
头大一血滴，将这一滴血滴在玻片的ZX1/3处然后用推片
的一角由血滴ZY向周围旋转涂成直径约一厘米的圆形血
膜，旋转涂制时间不宜过短，以免形成纤维蛋白束，遮盖了
疟原虫。
厚血薄涂好后，应平放待干，防苍蝇舔食血膜或灰尘落
在上面。受检者的编号可用铅笔或钢笔写在薄血膜的边缘
上，也可用蜡笔写在厚血膜一端。
三、染色
常用的染色方法有姬姆萨氏和瑞氏两种
(一)吉氏染色法，吉氏染剂是Z可靠的血膜染剂其优
点是易于掌握很少染色过度，染好后的血膜褪色较慢
1.吉氏染剂的配制
吉氏染剂粉 0.5g
甘油，中性，25ml
甲醇，纯，分析纯，25ml
将吉氏染剂粉0.5臵于乳钵中，加少许甘油充分研磨
再加甘油研磨，直至25甘油加完为止。将充分研磨的吉氏
甘油液倒入无水，干净的棕色玻塞瓶中，然后分次加甲醇于
乳钵洗出染剂倒入瓶中，直至25甲醇将乳钵洗净并全部倒
入瓶中，塞紧，充分摇匀，放臵室内一星期，每天摇动数次
以后即可使用.
2.缓冲液的配制;
为了保证染色良好，使疟原虫的核和胞浆红兰分明，感
染的红血球上的薛氏小点清楚，在稀释染剂厚液时所用的
蒸馏水必须加缓冲液，缓冲蒸馏水。新鲜蒸馏水可能接近
中性，但贮存在一个时期后，由于吸收了空气中的 而变为
酸性，因此蒸馏水中必须加缓冲液，使其达到我们需要的效
果。
缓冲液配制
磷酸氢二钠，无水 9.5g
蒸馏水 1000ml
磷酸二氢钾 9.07g
蒸馏水 1000ml
将上二液分别贮存于紧塞的玻瓶中。
稀释染剂所用的蒸馏水的ph以7.0-7.2为Z适宜现
用现配可按下表配制缓冲蒸馏水的配制（ml）
ph 磷酸二氢钠液 磷酸二氢钾液 蒸馏水
6.6 37 63 900
6.8 49 51 900
7.0 63 37 900
7.2 73 27 900